Instalación de una ventana de imagen pancreática intravital en un modelo de ratón: una ventana de imagen pancreática integrada para la obtención de imágenes in vivo de lapso de tiempo de la microestructura del páncreas murino

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Cirugía

1. Prepare una plataforma quirúrgica estéril y esterilice las superficies con etanol al 70%.|
   nota: Para las sesiones de imagen longitudinal, la técnica aséptica es fundamental.
2. Anestesiar ratones con una mezcla de tiletamina/zolazepam (30 mg/kg) y xilacina (10 mg/kg)
   nota: Se recomienda el uso de tiletamina/zolazepam en lugar de ketamina debido a su efecto adverso de hiperglucemia. Se debe seleccionar la anestesia óptima para el propósito del experimento.
3. Controle la temperatura corporal con una sonda rectal con una almohadilla térmica controlada por homeotermia.
4. Afeita el flanco izquierdo del ratón y aplica tres rondas de exfoliante a base de alcohol y yodo alternado.
   nota: Si se usa crema depilatoria, no dejar más de 1 minuto para evitar quemaduras químicas.
5. Haz una incisión de 1,5 cm en el flanco izquierdo del ratón y disecciona la piel y el músculo.
6. Realice una sutura de cuerda de bolsa con una sutura 4-0 negra o de nailon en el margen de la incisión.
7. Use un microrretractor en la incisión y exponga suavemente el bazo.
8. Agrupe cuidadosamente el bazo con pinzas de anillo e identifique el páncreas.
9. Coloque la ventana en el flanco del ratón y pase el bazo y el páncreas a través del espacio abierto de la ventana. La manipulación del páncreas debe ser muy suave, ya que puede causar sangrado o pancreatitis.
   nota: Diseñe a medida la ventana de imagen intravital pancreática para aislar el páncreas del intestino en la cavidad abdominal (Figura 1A, B).
10. Coloque suavemente el páncreas en la placa de la ventana de diagnóstico por imágenes; el bazo se colocará en el espacio abierto de la ventana.
11. Aplique gotas de pegamento de cianoacrilato de N-butilo en el margen de la ventana de imagen.
    1. Para minimizar la cantidad de pegamento aplicado, utilice una aguja de catéter de 31 G para la aplicación. Si la cantidad de la gota es grande, entonces el pañuelo se adherirá involuntariamente a la ventana o al vidrio.
12. Aplique suavemente un cubreobjetos redondo de 12 mm en el margen de la ventana de imagen.
13. Tire del lazo de sutura para que encaje en la ranura lateral de la ventana y átelo tres veces.
14. Corte el sitio proximal máximo del nudo para evitar la interrupción de los puntos apretados cuando estos ratones están despiertos.
15. Deje que los ratones se recuperen de la anestesia (2-3 horas) e inyecte ketoprofeno (5 mg/kg, subcutáneo en la piel suelta en la base del cuello o la cadera del animal) para aliviar el dolor. Vuelva a evaluar los signos de dolor cada 12 horas y se debe considerar el ketoprofeno cada 24 horas durante 1-3 días><. nota: La analgesia influye en la secreción de insulina en respuesta a la glucosa. La elección y el momento de la analgesia deben ser individualizados para el propósito experimental.
16. Acomode al ratón en la jaula con suficiente ropa de cama para evitar el contacto de la ventana con la jaula. Evite alojar la casa con los ratones sin la cirugía de ventana.

Figura 1. Diseño y fotografía de la ventana de imagen intravital pancreática. (A) Una vista 3D y transversal de la ventana de imágenes intravitales pancreáticas. (B) Fotografía anterior y posterior de la ventana de imagen pancreática.