Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Procedimiento de imagen
- Coloque al ratón en una cámara de inducción para anestesia gaseosa y suministre isoflurano al 3% en oxígeno puro hasta que el animal esté completamente anestesiado. Verifique la profundidad de la anestesia por falta de respuesta al pellizco de la pata.
- Transfiera al animal a una tabla calentada, una parte constitutiva de la estación de imágenes UHFUS, manteniendo al animal en posición supina. Use una sonda rectal lubricada con vaselina para medir la temperatura corporal. Ajuste la temperatura de la placa para mantener la temperatura corporal del ratón en el rango fisiológico (36 ± 1 °C).
- Humedece los ojos del ratón con ungüento veterinario para evitar la sequedad durante la anestesia. Suministro de gas narcótico (isoflurano al 1,5% en oxígeno puro) a través de la máscara nasal de un ratón. Ajuste el porcentaje de isoflurano para mantener la profundidad correcta de la anestesia.
- Cubra las patas delanteras y traseras con pasta conductora y péguelas con cinta adhesiva a los electrodos de placa de ECG incrustados en la tabla. Comprobar que los parámetros fisiológicos (frecuencia cardíaca, señal respiratoria y temperatura corporal central) se adquieren y visualizan correctamente.
- Eliminar el vello de ambas zonas inguinales aplicando un agente depilatorio y cubrirlas con un medio de acoplamiento acústico.
- Sujete la sonda lineal UHFUS (frecuencia central de 40 MHz) en un motor 3D especializado integrado en la estación de imágenes UHFUS, lo que permite el movimiento automatizado y escalonado de la sonda.
- Oriente y ajuste correctamente la posición de la sonda de ultrasonido para obtener imágenes de eje corto del ganglio linfático inguinal (izquierda/derecha) y coloque la región de interés en la zona focal.
- Escanee todo el volumen del ganglio linfático inguinal como una secuencia de imágenes 2D en modo B, como se describió anteriormente. Adquiera imágenes en múltiples niveles del ganglio linfático mediante el movimiento lineal del transductor con tamaños de paso a escala micrométrica, para generar datos 3D en términos de bucles de cine automatizados con respiración y control cardíaco.
- Configure la grabación de la imagen con los siguientes parámetros: distancia de escaneo entre 2 y 5 mm (dependiendo del tamaño del ganglio linfático); tamaño del paso 44 μm, con un resultado de 46-114 pasos de escaneo/cortes de ganglios linfáticos y un tiempo de adquisición de 1-3 min por animal. Almacene digitalmente las imágenes adquiridas en formato RAW (DICOM) para su posterior análisis fuera de línea.
