Extracción de la copa de la retina del ratón: un procedimiento quirúrgico para obtener la copa de la retina intacta del ojo del ratón

Resumen

Fuente: Jiang, K. et al. Determinación de la respiración mitocondrial y la glucólisis en muestras de tejido retiniano ex vivo. J. Vis. Exp (2021)

Este video describe un protocolo para aislar la copa de la retina sin las capas externas que la cubren del globo ocular de un ratón. El tejido retiniano extraído puede ayudar a estudiar varias vías metabólicas que ocurren en las células de la retina.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Disección de la copa de la retina

1. Eutanasia de un ratón por asfixia con CO₂ siguiendo las directrices institucionales sobre eutanasia.
   nota: No deje al animal en una cámara de CO₂ más tiempo del necesario para la eutanasia.
2. Enuclear los ojos y colocarlos en un tampón PBS 1x del suelo en una placa de Petri y luego colocarlo bajo un microscopio de disección.
3. Retire con cuidado, cortando con microtijeras, los músculos rectos adicionales unidos fuera del globo ocular y corte el nervio óptico.
4. Use una aguja de 30 G para perforar un agujero en el borde de la córnea (limbo); esto sirve como el sitio de inserción para las microtijeras. A continuación, utilice unas microtijeras de disección fina para hacer un corte circular a lo largo del borde de la córnea, separándola de la copa ocular posterior.
5. Use pinzas de disección afiladas para quitar la córnea, el cristalino y el humor vítreo de la copa del ojo.
6. Use microtijeras de disección fina para hacer varios cortes pequeños en la capa escleral en el borde de la copa del ojo. Evite cortar la capa de la retina. Use dos pinzas de disección afiladas para sujetar el tejido escleral a cada lado de la incisión y tire con mucho cuidado de la capa escleral para eliminarla de la retina neural. Repita esto alrededor de la copa del ojo hasta que se retire toda la esclerótica y se obtenga una copa de retina intacta.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
1X PBS	Termo Fisher	14190-144
Aguja de calibre 30	Deslizamiento de precisión BD	305106
Punzonadora de biopsia, 1 mm	Integra Miltex	33-31AA
Cámara de asfixia con CO2
pinza de disección-Dumont #5	Herramientas de Bellas Ciencias	11251-10	Punta recta
pinza de disección-Dumont #7	Herramientas de Bellas Ciencias	11274-20	Punta curvada
Microscopio de disección
Pinzas de Graefe	Herramientas de Bellas Ciencias	11051-10	Punta curvada, dentada
Microtijeras	Herramientas de Bellas Ciencias	15004-08	Punta curvada