Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Operación de resección apical en ratón Cx3cr1 GFP/+ neonatal de 1 día de edad (fondo C57BL/6)
- anestesia
- Saca todos los cachorros de ratón de las jaulas y colócalos en una caja limpia y seca.
- Incruste cada ratón en el hielo durante unos 2-3 minutos. Asegúrese de que haya una barrera delgada, como látex o gasa, entre el hielo y el cachorro de ratón para evitar la congelación.
- Identifique la anestesia suficiente observando los siguientes signos: piel pálida, falta de movimiento de las extremidades y falta de reflejo pedal
.
- toracotomía
- Enfriar previamente la plataforma de operaciones de bronce durante la noche a -20 °C para ayudar a mantener la anestesia.
- Saque el ratón anestesiado de la nevera y colóquelo en una plataforma operativa de bronce. Ancle el ratón en la plataforma de control en posición supina con cinta adhesiva médica.
- Coloque la plataforma de operación con el mouse debajo de un estereoscopio.
- Desinfecte el pecho del ratón con una almohadilla de preparación empapada con betadine y alcohol al 70% o de acuerdo con la política institucional.
- Incidir la piel con un corte de 1 cm en la cuarta zona intercostal de la cavidad torácica y luego separar los músculos intercostales con unas tijeras microquirúrgicas hasta acceder al corazón.
- Presione alternativamente el tórax y el abdomen con la ayuda de dos fórceps hasta que el corazón se exteriorice fuera del tórax sin ningún daño mecánico.
- Coloque las costillas por debajo y por encima de la pequeña incisión como una fijación natural para inmovilizar el corazón.
- Resección del ápex ventricular
- Localiza el vértice del ventrículo izquierdo. Corte un diámetro de 1 mm de tejido del ápice ventricular con unas tijeras de iridectomía bajo un estereoscopio.
- Confirme que la cámara ventricular izquierda está expuesta y comience a supurar.
- Presione suavemente el corazón hacia la cavidad torácica con un hisopo de algodón.
- Sutura los músculos, las costillas y la piel con 8-0 Suturas de prolene.
- Limpie bien el mouse después de la operación.
- Cuidados postoperatorios
- Transfiera el ratón de la plataforma de control a una manta térmica de 37 °C para calentar el cuerpo inmediatamente después de la operación.
- Confirme la anabiosis del ratón observando los siguientes signos: restauración espontánea de la respiración, cambio de color de la piel de pálido a rosado y movimiento de las extremidades.
- Lleve el ratón operado de vuelta a su madre una vez que se haya recuperado.
- Mezcle el ratón operado con los materiales de anidación de su madre si es necesario.
nota: Es importante separar a todos los cachorros de 1 día de la madre a la vez y luego devolverlos todos a la vez después de que se hayan recuperado todos los cachorros.
