Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
>1. Interrupción quirúrgica de los linfáticos de la cola de ratón
- Utilice ratones C57BL/6 de ocho semanas de edad con distribución equitativa por género.
- Colocar un ratón bajo anestesia general en una cámara de inducción con isoflurano al 3-4% en oxígeno al 100%, seguido de sedación de mantenimiento al 1-3% durante el procedimiento.
- Administrar 0,5 mg/kg de buprenorfina de liberación sostenida (SR) por vía subcutánea para el control del dolor.
nota: Fármacos analgésicos adicionales administrados después de la operación: Carprofeno una vez cada 24 h durante al menos 48 h y bupivacaína una vez, ya sea después de realizar la incisión o antes de cerrar la incisión, aplicados por goteo sobre los bordes de la piel (dura hasta 4 – 6 h).
- Coloque el ratón dorsalmente y prepare la cola con alcohol isopropílico al 70%.
- Mida el diámetro de la cola antes del procedimiento en incrementos de 5 mm, comenzando a 20 mm de la base de la cola con un calibrador. Estas mediciones se utilizarán para calcular el volumen utilizando la ecuación del cono truncado.
- Marque una escisión circunferencial de 3 mm en la cola a 20 mm de la base.
- Realizar una escisión meticulosa de la piel de 3 mm de espesor completo con una cuchilla quirúrgica estéril (tamaño 15), dejando toda la vasculatura subyacente intacta bajo aumento microscópico quirúrgico. Incidir primero la marca circunferencial superior (20 mm desde la base de la cola) a través de la dermis, seguida de una incisión circunferencial de espesor completo 3 mm distal a la primera incisión
- Haga una incisión vertical perpendicular de espesor completo para conectar las dos incisiones. Use una pastilla fina dentada para agarrar un borde de ataque y use microtijeras para diseccionar cuidadosamente la adsección profunda del plano avascular hasta la dermis y la adventicia superficial de la vena.
- Inyectar 0,1 mL de azul de isosulfán (1%) por vía subcutánea proximal a la punta de la cola.
- Identifique los dos canales linfáticos adyacentes a las venas laterales de la cola bajo el microscopio quirúrgico. Los linfáticos aparecerán azules debido a la inyección de isosulfán. Transecte los linfáticos con tijeras microquirúrgicas rectas. Use las tijeras para diseccionar cuidadosamente un plano entre la vena lateral y la linfática. A continuación, pase la punta de una hoja de tijera entre el vaso linfático y la vena lateral y cierre las hojas para atravesar el vaso linfático.
- Venda la herida de la cola con un apósito transparente adherente estéril. Revise las incisiones postoperatorias diariamente para asegurarse de que no estén infectadas o sangren y brinde cuidado a la herida durante 2 semanas.
- Aloje a los animales individualmente para evitar más lesiones en la cola y para evitar que los animales se muerdan entre sí, lo que provocaría complicaciones quirúrgicas.
