Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Preparación y posicionamiento del láser Doppler
- Prepare un soporte para la sonda láser Doppler cortando la punta de una punta de pipeta de 10 μL (3-5 mm de longitud).
nota: Todos los instrumentos se esterilizan con un esterilizador de perlas calientes. Las superficies también se desinfectan antes y después de la cirugía con un spray desinfectante microbiano. Antes de la cirugía, las áreas que rodean la cabeza y el pecho de los ratones se desinfectan con un spray desinfectante de heridas.
- Inyectar analgesia al ratón 30 min antes de la cirugía (4 mg/kg de carprofeno y 0,1 mg/kg de buprenorfina, por vía intraperitoneal).
- Anestesiar al ratón colocándolo en la cámara de inducción con un caudal de isoflurano del 4% hasta el cese del movimiento corporal espontáneo y de las vibrisas.
- Coloque el ratón en posición prona en el área de operación con la nariz en la máscara de anestesia. Mantenga la concentración de isoflurano al 4% durante un minuto más, luego redúzcala y manténgala al 2%.
- Ajuste la almohadilla térmica controlada por retroalimentación asociada para mantener la temperatura corporal del ratón a 37 °C e inserte suavemente la sonda rectal para controlar la temperatura durante los procedimientos quirúrgicos.
- Aplique el ungüento oftálmico de dexpantenol en ambos ojos.
- Desinfecte la piel y el vello que rodea el ojo y la oreja izquierdos con etanol al 70%.
- Corta el cuero cabelludo entre la oreja izquierda y el ojo (1 cm de largo) para exponer el hueso del cráneo.
- Corta y retira el músculo temporal para visualizar el MCA debajo del cráneo.
- Fije con pegamento la parte exterior de la punta que sujeta la sonda/fibra láser Doppler en la parte superior del MCA izquierdo con pegamento. Luego, pegue la piel para cerrar la herida alrededor del soporte de la punta. Aplique 2-3 gotas de pegamento endurecedor para acelerar el proceso. Asegúrese de que la fibra láser Doppler no esté pegada y se pueda quitar fácilmente del soporte de la punta en cualquier momento.
