Inducción quirúrgica de la inestabilidad de la columna lumbar en un modelo de ratón: un procedimiento quirúrgico para la resección de las apófisis espinosas lumbares y los ligamentos conectados en un modelo murino

Resumen

Fuente: Liu, S. et al. Un modelo de ratón de inestabilidad de la columna lumbar. J. Vis. Exp. (2021)

En este video, describimos el procedimiento quirúrgico para inducir la inestabilidad de la columna lumbar en un modelo de ratón mediante la resección de la apófisis espinosa lumbar L3 a L5 junto con ligamentos supraespinosos e interespinosos.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Preparación previa a la operación

1. Esterilización del instrumental: Esterilizar el instrumental quirúrgico con vapor en un autoclave (121 °C durante 15 min) antes de la cirugía. Empaque los instrumentos en un recipiente de metal y manténgalos hasta que se usen en la cirugía.
2. Montaje de la plataforma quirúrgica: Asigne un área de banco de al menos 60 cm x 60 cm para la operación. Limpie la superficie del área con alcohol al 75% y cúbrala con una toalla médica desechable. Coloque un paquete de instrumentos quirúrgicos estériles, reactivos y artículos quirúrgicos en una toalla médica desechable dentro del 1/3 superior del área. Deje limpios los 2/3 restantes del área para la operación quirúrgica y agregue una almohadilla caliente debajo de la almohadilla quirúrgica para soporte térmico.
3. Preparación animal
   1. Coloque el animal (ratones C57BL/6J, macho, 8 semanas de edad) en la cámara de inducción. Encienda el vaporizador a un nivel de inducción del 4% para el isoflurano y de 4 L/min para el oxígeno. Después de que el animal esté completamente anestesiado, mantenga el anestésico con el cono de la nariz y la administración de anestésico a un nivel de 1,5% para el isoflurano y 0,4 L/min para el oxígeno durante la cirugía. Controle la respiración del animal.
   2. Aplique el ungüento ocular de clortetraciclina clorhidrato para prevenir la sequedad de la córnea durante la cirugía.
   3. Afeitar el área quirúrgica en la superficie dorsal desde la región torácica inferior hasta la parte superior de la región sacra con un recortador de animales pequeños. Retire el pelaje afeitado con toallitas de seda.
   4. Aplique la crema depilatoria sobre la zona afeitada y déjela allí no más de 3 min. Retire la crema con una gasa y enjuague con 2 mL de solución salina estéril al 0,9%.
   5. Coloque una almohadilla cilíndrica quirúrgica hecha a medida (Figura 1A) debajo del abdomen del ratón para elevar la columna lumbar y facilitar la operación quirúrgica.

2. Exposición de las apófisis espinosas del tercio lumbar al quinto lumbar (L₃–L₅)

1. Use el dedo índice para tocar las apófisis espinosas subcutáneas de las vértebras lumbares, que son más externas, y compárelas con las vértebras torácicas y las vértebras sacras para identificar la región lumbar.
2. Enjuague la piel con alcohol al 75%. Realice una incisión de 3 a 4 cm en la línea media de la piel sobre la región de la madera desde la región torácica media hasta la cadera con una hoja de bisturí para exponer la fascia.
3. Identificar la columna lumbar por la morfología de la fascia posterior insertada en las puntas de las apófisis espinosas. En detalle, las fascias de la tercera lumbar (L₃) a la primera sacra (S₁) se distinguen de otras fascias por sus formas de "V". La última punta en "V" se conecta a la primera fascia sacra (S₁) y la primera punta en "V" corresponde a la apófisis espinosa L₃ (Figura 1B).
4. Realizar las incisiones del músculo paraespinoso posterior a lo largo de las apófisis espinosas de L₃ a L₅ en ambos lados lateralmente con una hoja de bisturí (Figura 1C). Controle la profundidad de la incisión hacia las facetas para reducir la hemorragia.
5. Separe las capas musculares con dos pinzas oftálmicas para exponer las apófisis espinosas L₃ a L₅ y los ligamentos supraespinosos.

3. Resección de las apófisis espinosas L ₃–L₅ junto con los ligamentos

1. Separe los procesos espinosos individuales cortando los ligamentos interespinosos con tijeras de Venus (Figura 1D).
2. Resecar las apófisis espinosas L_{3-L 5} junto con los ligamentos interespinosos con cizallas de Venus (Figura 1E).
3. Suturar la incisión cutánea con seda estéril trenzada (tamaño de sutura 5.0) sin volver a unir los músculos paravertebrales.
4. Aplique el ungüento ocular de clorhidrato de clortetraciclina en el sitio quirúrgico.

Resultados

Figura 1: Exposición de las apófisis espinosas L3-L5 y funcionamiento del LSI. (A) Se coloca una almohadilla cilíndrica hecha a medida debajo del abdomen del ratón. (B) Exposición de las fascias lumbares e identificación de las apófisis espinosas L3 a S1 por formas de "V". (C) Incisiones laterales del músculo paraespinoso a ambos lad...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Pomada para ojos de clortetraciclina clorhidrato	Shanghai General Pharmaceutical Co., Ltd.	H31021931	Prevenir la sequedad de los ojos, Prevenir la infección de la herida
Ratones machos C57BL/6J	Compañía farmacéutica Tian-jiang (Jiangsu, CN)	SCXK2018-0004	Modelo animal
Toalla médica desechable	Henan Huayu Dispositivos Médicos Co., Ltd.	20160090	Plataforma para operaciones quirúrgicas
Equipo de anestesia inhalante	MARCA MEDIA	Matrx 3000	anestesia
Isoflurano	Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd.	1903715	anestesia
Clorhidrato de lidocaína	Shandong Hualu Farmacéutica Co., Ltd.	H37022839	Alivio del dolor
Aguja de sutura médica	Shanghai Pudong Jinhuan Productos Médicos Co., Ltd.	20S0401J	Sutura de la piel
Pinzas oftálmicas	Shanghai Medical Devices (Group) Co., Ltd. Fábrica de instrumentos quirúrgicos	JD1050	Corta la piel
Tijeras oftálmicas (10cm)	Shanghai Medical Devices (Group) Co., Ltd. Fábrica de instrumentos quirúrgicos	Y00030	Incisión en la piel
Trenzado de seda	Shanghai Pudong Jinhuan Productos Médicos Co., Ltd.	11V0820	Sutura de la piel
Recortadora de animales pequeños	Shanghai Feike Electric Co., Ltd.	FC5910	depilación
Cuchillas quirúrgicas estériles (12 #)	Shanghai Pudong Jinhuan Productos Médicos Co., Ltd.	35T0707	Incisión muscular
Crema depilatoria Veet	RECKITT BENCKISER (India) Ltd	Na	depilación
Tijeras de Venus	Equipos médicos Mingren	Longitud: 12,5 cm	Cortar el músculo y la apófisis espinosa