Biopsia de pellizco guiada por colonoscopia en un modelo de ratón: una técnica para visualizar y extraer muestras de tejido del colon de ratón

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Colonoscopia e inducción de heridas

1. Ensamble previamente los componentes del endoscopio insertando primero el endoscopio de orificio rígido de 1,9 mm en la vaina (Figura 1A-B). Conecte la bomba de aire (para proporcionar insuflación colónica) usando el tubo provisto, a la válvula de gas en el lado izquierdo de la vaina junto al canal de trabajo (Figura 1C).
   nota: Aunque la lente descrita aquí es de 0°, también se puede usar una lente de 30° para este propósito.
2. Asegúrese de que el canal de trabajo esté en la posición abierta e inserte pinzas de biopsia de 3 Fr a través del canal de trabajo y avancelo hasta el final de la vaina (asegurándose de que no sobresalga de la vaina) (Figura 1C). Conecte el endoscopio ensamblado a la fuente de luz y al dispositivo de imágenes de video según las instrucciones del fabricante.
3. Anestesiar al ratón con isoflurano al 5% con oxígeno en una cámara de inducción. A continuación, traslade el ratón a una plataforma de estadificación endoscópica que contenga un sistema de calentamiento (para evitar la hipotermia) en su lado ventral y manténgalo bajo anestesia utilizando un cono nasal con isoflurano al 2% con oxígeno. Agregue ungüento veterinario a los ojos para prevenir la sequedad mientras está bajo anestesia. Asegúrese de que el ratón esté completamente anestesiado pellizcando suavemente el pie trasero para comprobar si hay un reflejo.
   nota: Cualquier cepa o sexo de ratones puede ser utilizado con esta técnica; Sin embargo, es preferible que los ratones tengan al menos 8 semanas de edad, para que sean lo suficientemente grandes para el procedimiento.
   1. Agregue ungüento veterinario a los ojos para prevenir la sequedad mientras está bajo anestesia.
   2. Asegúrese de que el mouse esté completamente anestesiado pellizcando suavemente el pie trasero para probar si hay un reflejo.
4. Llene una jeringa de 3 mL con una aguja de sonda nasogástrica para ratas adjunta con solución salina tamponada con fosfato (PBS) a temperatura ambiente. Inserte la aguja aproximadamente 1 cm en el ano del ratón e infunda suavemente PBS para eliminar el material fecal. Varias bolitas fecales deben salir del ratón junto con el PBS que se infundió.
   nota: La instilación de un volumen excesivo de PBS puede dar lugar a la formación de espuma en el lumen, lo que podría oscurecer la visualización del lumen.
5. Inserte el endoscopio ensamblado 0,5 cm en el ano del ratón. Avance las pinzas de biopsia en la luz del recto hasta que las "mandíbulas" completas (incluida la bisagra) de las pinzas estén más allá del extremo de la vaina (como se observa en el monitor de video). Gire las pinzas 90° para que las mandíbulas se abran en una orientación este-oeste.
6. Para hacer una biopsia, abra las pinzas y avance aproximadamente 1 cm, cierre las pinzas y, con un movimiento suave, tire rápidamente de las pinzas mientras las deja cerradas.
   1. Evite insuflar completamente el colon al realizar la biopsia. Por lo tanto, deje abierto el lado derecho de la válvula de gas durante este paso; Aunque hay que tener en cuenta que al abrir las pinzas se corre el riesgo de dañar la mucosa cuando el colon está en esta posición.

Figura 1: Elementos necesarios para la realización de biopsias. (A) Imagen de la lente (a), la vaina (b) y las pinzas de biopsia (c). (B) Inserción de la lente en la vaina. (C) Inserción de pinzas a través del canal de trabajo de la vaina (flecha sólida). La flecha discontinua indica la ubicación correcta para la conexión de la bomba de aire.