Modelo de herida murina guiada por colonocopio: un método para aislar el lecho de la herida inducida por biopsia del colon para comprender el proceso de curación

Resumen

Fuente: Montrose, D. C., et al. Realización de biopsias de pellizco guiadas por colonoscopia en ratones y evaluación de cambios tisulares posteriores. J. Vis. Exp. (2021).

En este video, describimos un procedimiento para aislar el lecho de la herida inducida por colonoscopia en un punto de tiempo apropiado para un análisis molecular detallado. Este análisis ayuda a comprender el proceso de cicatrización de heridas en condiciones inflamatorias del tracto gastrointestinal.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Recogida del lecho de la herida para el análisis molecular

1. Eutanasia de ratón mediante asfixia por CO₂ seguida de luxación cervical (o técnica equivalente) el día seleccionado después de la biopsia.
2. Recolecta la región distal del colon abriendo la piel y el músculo abdominal para exponer la cavidad corporal. Coloque unas tijeras cerradas debajo del colon y levántelo suavemente para liberarlo del mesenterio subyacente y luego corte el colon en su punto medio y en el ano para sacarlo del ratón.
3. Enjuague el contenido fecal con una aguja de sonda nasogástrica para ratas conectada a una jeringa de 20 ml llena de PBS 1x helado y luego coloque el colon sobre papel de filtro.
4. Corta el colon longitudinalmente sobre papel de filtro asegurándote de que el lado mesentérico esté boca abajo contra el papel de filtro. Aplique azul de metileno al 0,2% sobre la mucosa con una pipeta de compresión mientras el pañuelo aún está en el papel de filtro y luego drene el exceso de azul de metileno. Observe el colon bajo un microscopio de disección y localice el lecho de la herida (Figura 1A).
5. Con unas tijeras de micro iris de 4 pulgadas, corte alrededor del borde del lecho de la herida (Figura 1A, círculo discontinuo) teniendo cuidado de no cortar la capa muscular (a menos que se desee el músculo) y transfiera el lecho de la herida diseccionado a un tubo con pinzas de punta fina para la congelación instantánea o el método de almacenamiento deseado.
   nota: La cantidad de tejido recolectado de esta manera es suficiente para extraer ARN para análisis de secuenciación de ARN o equivalente.

Resultados

Figura 1: Imágenes ex vivo y seccionadas del lecho de la herida. (A) Se extrajo un colon de un ratón 2 días después de la biopsia, se tiñó con azul de metileno al 0,2% y se tomaron imágenes bajo un microscopio de disección. El círculo discontinuo indica los bordes del lecho de la herida. La línea negra indica la ubicación correcta para dividir en dos el lecho de la herida/colon antes de la inclusión ...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Pinza de biopsia, 3 Fr	Karl Storz	61071ZJ
isofluorano	Codicia	Artículo 2905
Azul de metileno	Sigma-Aldrich	M9140
Tijeras Micro Iris	Integra	18-1619
Bisturí con cuchilla #10	Hill-Rom	372610