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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Preparación de los animales
- Sedar a un cerdo mediante inyección intramuscular (i.m.) de tiletamina (3,75 mg/kg) y zolazepam (3,75 mg/kg) y dexmedetomidina (37,5 μg/kg). Espera a que quede inconsciente.
- Prepare una vía intravenosa insertando una cánula de 20 G en la vena del oído.
nota: Asegúrese de que la cánula esté en la vena inyectando 5-10 ml de solución salina a través de la cánula. Si se ha pasado por alto la vena, esto se notará por un pequeño edema en el tejido del oído.
- Intuble al cerdo para asegurarse de que la frecuencia respiratoria pueda regularse durante toda la cirugía.
nota: Asegure el éxito de la intubación aplicando presión sobre el tórax del cerdo y confirme que el aire espirado a la fuerza está saliendo del tubo de intubación.
- Conecte el tubo de intubación a un ventilador configurado a una frecuencia respiratoria de 14 respiraciones/min.
- Conecte un oxímetro de pulso y un brazalete a la cola para controlar la frecuencia cardíaca (FC), la presión arterial (PA) y la saturación de oxígeno (sats). Inserte un termómetro rectal para controlar la temperatura central.
- Prepare una bolsa intravenosa de ketamina (5 mg/kg/min), midazolam (0,25 mg/kg/min) y fentanilo (2,5 μg/kg/min), en solución salina y comience a infundir a través de la vena del oído a aproximadamente 2 gotas/s.
nota: A lo largo de la cirugía, puede ser necesario aumentar o disminuir la velocidad de infusión en función de los signos vitales del animal.
- Con el cerdo en posición prona, palpar la parte posterior de la cabeza y el cuello del animal para localizar y marcar la cresta occipital y la columna vertebral de las primeras vértebras torácicas y la base de cada oreja.
- Dibuja una línea recta entre la cresta y las vértebras a lo largo del eje longitudinal. Dibuja dos líneas desde la cresta hasta la base de cada oreja siguiendo la base del cráneo (Figura 1A).
- Compruebe que el animal está en un sueño profundo sujetando cuidadosamente la cola y observando la ausencia de un reflejo de la cola.
nota: Si el animal todavía está reflejo, la velocidad de infusión de anestésico debe aumentarse gradualmente hasta que el animal ya no exhiba un reflejo.
2. Cirugía
NOTA: Durante toda la cirugía, es necesario tener al menos un asistente para succionar el sangrado leve y cauterizar cualquier vaso cortado.
- Usando un bisturí con una hoja # 21, haga una incisión dérmica a lo largo de la línea longitudinal hasta el músculo.
- Extienda dos incisiones dérmicas perpendiculares a lo largo de los hombros, de 10 a 15 cm de longitud.
- Desde las crestas occipitales, haga incisiones dérmicas a lo largo de la línea hasta la base de cada oreja.
- Agarrando las comisuras de la piel formadas en la cresta occipital con pinzas anatómicas, separe cuidadosamente la piel del músculo subyacente pasando ligeramente la hoja del bisturí sobre la fascia, moviéndose de la rostral a la caudal. Una vez que la piel ha sido resecada después de cada una de las cinco incisiones, partes de los músculos trapecios deben ser visibles.
- Hacer una incisión longitudinal con el bisturí, de aproximadamente 1 cm de profundidad, donde el trapecio se une en la línea media.
nota: Al cortar los músculos, hay una mayor propensión al sangrado, por lo que el cauterizador debe estar listo. Si se corta un vaso más grande, una persona debe comprimirlo rápidamente con la gasa, mientras que la otra persona usa el cauterizador.
- Usando una combinación de pinzas quirúrgicas rectas y curvas, realice una disección roma trabajando a lo largo del corte longitudinal en los músculos. Esto separará los vientres del trapecio, así como el músculo biventer semiespinoso del capitus subyacente.
- Cortar las fibras musculares persistentes con un bisturí y continuar la disección roma hasta que el semiespinoso complejo de la cabeza se haga visible.
- Cortar los orígenes de los músculos trapecios y semiespinales de la cabeza a lo largo de la cara posterior del cráneo. Sepáralos cuidadosamente longitudinalmente con el bisturí realizando una disección roma hasta que el semiespinoso capitus complexus sea completamente visible.
- Retraiga los músculos trapecios y semiespinales de la cabeza con retractores autorretenedores.
- Donde los vientres del semiespinoso complejo de la cabeza se unen en la línea media, haga una incisión longitudinal con el bisturí de aproximadamente 1 cm de profundidad.
nota: Esté atento a cualquier sangrado adicional aquí. El sangrado se puede controlar con una combinación de hisopos de algodón y cauterización.
- Con pinzas quirúrgicas, realice una disección roma a lo largo del corte longitudinal entre los vientres musculares hasta que la cara dorsal del atlas (IC) sea palpable.
- Cortar los orígenes de los músculos semiespinales del complejo de la cabeza a lo largo de la cara posterior del cráneo y separarlo longitudinalmente de las vértebras subyacentes mediante bisturí y disección roma.
- Retraiga los músculos semiespinales del complejo de la cabeza utilizando otro conjunto de retractores de retención automática.
- Con un bisturí, retire con cuidado cualquier resto de tejido que cubra la región donde el atlas se encuentra con la base del cráneo.
- Colocando un brazo debajo del cuello del animal y un dedo en la unión del atlas y el cráneo, eleve simultáneamente la cabeza y flexione el cuello mientras palpa con el dedo para revelar la cisterna magna con la otra mano><.
nota: La cisterna magna es reconocible al palpar como una estructura elástica fuerte con una pequeña cantidad de rebote a medida que se libera la presión con el dedo.
