Entrega de moléculas trazadoras en la cisterna magna: un método para administrar moléculas trazadoras fluorescentes a través de la canulación directa de la cisterna magna en cerdos

Resumen

Fuente: Bèchet, N. B., et al. Implantación directa de cánula en la cisterna magna de los cerdos. J. Vis. Exp. (2021).

Este video describe el protocolo para la administración de moléculas trazadoras a través de la canulación directa de la cisterna magna en el cerebro de un cerdo. Este método ayuda a visualizar la distribución del líquido cefalorraquídeo en el sistema glinfático.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Canulación e inyección

NOTA: Este paso requiere al menos dos personas y se realiza con la cabeza del animal elevada y el cuello flexionado.

1. Comience con un cerdo anestesiado, preoperado con cisterna magna accesible quirúrgicamente.
2. Asegúrese de que una persona eleve y flexione la cabeza y el cuello del animal mientras la otra palpa la cisterna magna tomando nota de su ubicación anatómica.
3. Introduzca lenta y cuidadosamente una cánula de 22 G a través de la duramadre y dentro de la cisterna magna en un ángulo oblicuo con respecto al eje longitudinal.
   nota: No inserte la cánula demasiado profundamente, ya que esto puede causar daño al cerebro. Saber hasta dónde insertar la cánula viene con la experiencia en comprender cómo se siente cuando la cánula perfora la duramadre. Esencialmente, justo cuando se ha perforado la duramadre, la cánula es lo suficientemente profunda como para una inyección exitosa del trazador. Esta profundidad es de aproximadamente 3-5 mm, pero variará según el tamaño o la edad del animal. El éxito de la canulación debe ser evidente de inmediato a través de la visualización de un líquido cefalorraquídeo claro y pulsátil que asciende por la cánula. Para obtener el mejor resultado, se recomienda practicar varias canulaciones previas en animales sacrificados para comprender la perforación dural.
4. Retire la aguja de la cánula y coloque una tapa en la cerradura.
5. Primero, aplique superpegamento y un acelerador donde la cánula ingresa al tejido, seguido de la aplicación del cemento dental. Espere 5 minutos para que el cemento se endurezca.
6. Retire con cuidado el tapón de la cánula y fije el extremo macho de la punción de la vía intravenosa con una extensión de 10 cm, con el marcador, a la cánula.
7. Inyecte lentamente el marcador a mano o con una bomba de microinfusión a una velocidad de 100 μL/min. Retire el grifo de vía intravenosa de 3 vías con extensión de 10 cm y reemplácelo con el tapón. El trazador ahora debería ser visible pulsando en la base de la cánula.
   nota: Si inyecta con la mano, hágalo hasta que el marcador aún sea visible en el eje de la cánula, aproximadamente 1-2 mm por encima de donde el cemento dental está cubriendo el eje.
8. Después de la inyección, coloque sacos de arena debajo del cuello para mantener cierta flexión. A continuación, se puede soltar la cabeza y dejar al animal en una posición prona de descanso.
9. Suelte los retractores de retención automática y coloque los músculos tal como estaban antes. Junte la piel sobre los músculos con pinzas de toalla quirúrgica.
10. Cubra las pinzas de toalla y la incisión con una gasa y luego con una manta para limitar la pérdida de calor.
11. Dejar circular el trazador durante el tiempo deseado antes de sacrificar al animal mediante inyección intravenosa de pentobarbital (140 mg/kg). Confirmar la eutanasia por la ausencia de ruidos cardíacos en la auscultación con un estetoscopio.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Aguja de 18G	Mediq
Jeringa de 1 ml	FischerSci	15849152
Cánula de 20G	Mediq	Na
Cánula de 22G	Mediq	Na
Albúmina sérica bovina Alexa-Fluor 647 Conjugado	ThermoFischer	A34785	2 viales (10 mg)
CaCl2	Sigmaaldrich	C1016
Cemento dental	Agnthos	7508
glucosa	Sigmaaldrich	G8270
Acelerador de CA Insta-Set	BSI-Inc	BSI-151
GRIFO de vía intravenosa, 3 vías con extensión de 10 cm	Bbraun	Na
Kcl	Sigmaaldrich	P9333
rotulador	Na	Na
MgCl2	Sigmaaldrich	M8266
Agua MilliQ	Na	Na
NaCL	Sigmaaldrich	S7653
NaH2PO4	Sigmaaldrich	S8282
NaHCO3	Sigmaaldrich	S5761
salino	Mediq	Na
Retractores autorretenedores	Na	Na
Superpegamento	Na	Na
Tijeras curvas quirúrgicas	Na	Na
Pinzas para toallas quirúrgicas	Na	Na