Monitorización multisistémica de anomalías epilépticas en conejos: un método para el registro simultáneo de vídeo EEG, ECG, capnografía y oximetría durante las convulsiones inducidas

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Para permitir que los conejos se aclimaten en los inmovilizadores y para que el investigador confirme objetivamente la estabilización de las frecuencias cardiorrespiratorias, equipe a todos los conejos con los sensores cardiorrespiratorios y neuronales y realice un monitoreo continuo por video durante > 1 hora, 1 - 3 veces por animal.

2. Experimento de medicación intravenosa (Pentylenetetrazol, PTZ)

1. Para visualizar la vena marginal de la oreja, afeita la superficie posterior de la oreja del conejo. Use una toallita de etanol al 70% para desinfectar el sitio y dilatar la vena marginal del oído. Esto se indica mediante el óvalo discontinuo negro en la Figura 1F.
2. En este punto, pídele a un experimentador que cubra la cara del conejo con la mano para disminuir el estrés del procedimiento. Un segundo experimentador canula cuidadosamente la vena marginal del oído con un angiocatéter estéril de 25 G.
3. Una vez que el catéter esté en la vena, coloque un tapón de inyección estéril en el extremo del catéter para que una aguja pueda introducir el medicamento por vía intravenosa. La ubicación del tapón de inyección se indica mediante un círculo azul en la Figura 1G.
4. Haz una férula envolviendo una gasa de 4 x 4 pulgadas con cinta adhesiva para que forme forma de tubo y colocándola dentro de la oreja del conejo. Luego, pegue la férula a la oreja para que el catéter quede asegurado en su lugar y permanezca en posición vertical, similar a la oreja sin cateterismo.
5. Inyecte 1 mL de 10 unidades USP por mL de solución salina heparinizada.
   nota: El catéter y el vaso deben estar visiblemente limpios de aire y permanecer permeables. Si el catéter no está en el vaso, la jeringa no empujará fácilmente y habrá acumulación de solución salina en el tejido subcutáneo.
6. Administre a los conejos dosis incrementales de PTZ por vía intravenosa de 1 mg/kg a 10 mg/kg en incrementos de 1 mg/kg cada 10 min. Anote al comienzo de cada dosis para indicar qué animal se está inyectando y la concentración del medicamento><. nota: Esto permite evaluar los efectos agudos y aditivos de la administración de PTZ. Alternativamente, para evaluar más a fondo los efectos crónicos de la PTZ en dosis bajas, el conejo recibe dosis repetidas en cada concentración de dosis baja, 7 dosis de 2 mg/kg, 3 dosis de 5 mg/kg, luego 3 dosis de 10 mg/kg, cada dosis se separa por 10 min.
7. Después de cada dosis, controle cuidadosamente el video-EEG-ECG-capnografía-oximetría para detectar cualquier anomalía neurocardíaca, eléctrica y respiratoria y evidencia visual de actividad epileptiforme. Tenga en cuenta estos cambios en tiempo real y durante el análisis posterior.
   nota: La actividad convulsiva a menudo comienza dentro de los 60 segundos posteriores a la administración de PTZ.

Figura 1: Conejo conectado al equipo.(A) La ubicación de los electrodos de ECG, el brazo izquierdo está indicado por un punto amarillo. El brazo derecho se indica con un punto blanco. La pierna izquierda se indica con un punto rojo. El suelo anterior a la pierna derecha se indica con un punto verde. (B) Conejo en sujeción con electrodos de ECG y EEG conectados. (C) Conejo juvenil en un retenedor con modificaciones apropiadas para acomodar a un conejo más pequeño, incluyendo un refuerzo debajo del conejo, espuma para el cuello y tubo de PVC cortado. (D) Conejo en el retenedor con ubicación de electrodos de EEG. El frontal derecho se indica con un punto naranja. El frontal izquierdo se indica con un punto rojo. El occipital derecho se indica con un punto amarillo. El occipital izquierdo se indica con un punto azul. La referencia se indica con un punto negro. (E) Conejo en sujeción con estimulador fótico y configuración de cabina de espejo. La fuente de luz se indica con un punto blanco. (F) Vena marginal de la oreja después de que la oreja de conejo ha sido afeitada y limpiada con alcohol. (G) Conejo con angiocatéter firmemente pegado en la vena marginal izquierda del oído. El sitio del tapón de inyección se indica con un punto azul. (H) Conejo con mascarilla unida al tubo de capnografía por una pieza en T que contiene una válvula unidireccional. (I) Diagrama de la mascarilla y la pieza en T conectadas al tubo de capnografía. Durante la inspiración, el aire de la habitación puede entrar en la pieza en T a través de una válvula unidireccional (flecha verde). Durante la espiración, el CO2 abandona la pieza en T al entrar en el tubo de capnografía (flecha amarilla). Debido a la pequeña cantidad de espacio muerto, se retiene muy poco CO2 en la pieza en T y, por lo general, es inferior a 5 mmHg.