Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Para permitir que los conejos se aclimaten en los inmovilizadores y para que el investigador confirme objetivamente la estabilización de las frecuencias cardiorrespiratorias, equipe a todos los conejos con los sensores cardiorrespiratorios y neuronales y realice un monitoreo continuo por video durante > 1 hora, 1 - 3 veces por animal.
2. Experimento de medicación intravenosa (Pentylenetetrazol, PTZ)
- Para visualizar la vena marginal de la oreja, afeita la superficie posterior de la oreja del conejo. Use una toallita de etanol al 70% para desinfectar el sitio y dilatar la vena marginal del oído. Esto se indica mediante el óvalo discontinuo negro en la Figura 1F.
- En este punto, pídele a un experimentador que cubra la cara del conejo con la mano para disminuir el estrés del procedimiento. Un segundo experimentador canula cuidadosamente la vena marginal del oído con un angiocatéter estéril de 25 G.
- Una vez que el catéter esté en la vena, coloque un tapón de inyección estéril en el extremo del catéter para que una aguja pueda introducir el medicamento por vía intravenosa. La ubicación del tapón de inyección se indica mediante un círculo azul en la Figura 1G.
- Haz una férula envolviendo una gasa de 4 x 4 pulgadas con cinta adhesiva para que forme forma de tubo y colocándola dentro de la oreja del conejo. Luego, pegue la férula a la oreja para que el catéter quede asegurado en su lugar y permanezca en posición vertical, similar a la oreja sin cateterismo.
- Inyecte 1 mL de 10 unidades USP por mL de solución salina heparinizada.
nota: El catéter y el vaso deben estar visiblemente limpios de aire y permanecer permeables. Si el catéter no está en el vaso, la jeringa no empujará fácilmente y habrá acumulación de solución salina en el tejido subcutáneo.
- Administre a los conejos dosis incrementales de PTZ por vía intravenosa de 1 mg/kg a 10 mg/kg en incrementos de 1 mg/kg cada 10 min. Anote al comienzo de cada dosis para indicar qué animal se está inyectando y la concentración del medicamento><.
nota: Esto permite evaluar los efectos agudos y aditivos de la administración de PTZ. Alternativamente, para evaluar más a fondo los efectos crónicos de la PTZ en dosis bajas, el conejo recibe dosis repetidas en cada concentración de dosis baja, 7 dosis de 2 mg/kg, 3 dosis de 5 mg/kg, luego 3 dosis de 10 mg/kg, cada dosis se separa por 10 min.
- Después de cada dosis, controle cuidadosamente el video-EEG-ECG-capnografía-oximetría para detectar cualquier anomalía neurocardíaca, eléctrica y respiratoria y evidencia visual de actividad epileptiforme. Tenga en cuenta estos cambios en tiempo real y durante el análisis posterior.
nota: La actividad convulsiva a menudo comienza dentro de los 60 segundos posteriores a la administración de PTZ.
