Extracción de tejido bronquiolar de cerdo: un procedimiento para diseccionar secciones de tejido bronquiolar de pulmones porcinos

Resumen

Fuente: Harrington, N. E. et al. Pruebas de eficacia antibiótica en un modelo ex vivo de biopelículas de Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus en el pulmón de fibrosis quística. J. Vis. Exp. (2021)

En este video, describimos un procedimiento quirúrgico para extraer tejidos bronquiolares de pulmón de cerdo recolectado. El tejido bronquiolar ex vivo podría utilizarse para desarrollar modelos de infección para el estudio de las infecciones pulmonares crónicas.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Disección de tejido pulmonar de cerdo ex vivo (EVPL)

1. Obtener los pulmones de la fuente designada tan pronto como sea posible después del sacrificio, asegurándose de que se mantengan fríos transportándolos al laboratorio en una nevera doméstica.
   nota: Los pulmones más cercanos al día del sacrificio muestran menos hematomas durante el almacenamiento, pero también se puede utilizar tejido mantenido en almacenamiento en frío hasta 4 días después del sacrificio. Dado que la nevera portátil debe llevarse a la carnicería o al matadero, debe descontaminarse siguiendo las directrices del laboratorio local después de cada uso y almacenarse fuera del laboratorio de microbiología cuando no esté en uso, para reducir el riesgo de contaminación y de ruptura de la contención.
2. Trabajando sobre una superficie esterilizada y bajo una llama, coloque los pulmones sobre una tabla de cortar de plástico limpia cubierta con papel de aluminio esterilizado en autoclave. Comprueba que los bronquiolos permanezcan intactos. Si ha habido algún daño en el matadero o durante el transporte, los pulmones no son adecuados para su uso.
3. Caliente una espátula bajo una llama y toque muy brevemente el cuchillo en el área del pulmón que rodea el bronquiolo para esterilizar la superficie del tejido.
4. Corte el tejido superficial que rodea el bronquiolo con una cuchilla de afeitar estéril montada. Haga incisiones paralelas al bronquiolo para evitar cualquier daño.
5. Una vez que el bronquiolo haya sido expuesto, haga una incisión transversal a través del bronquiolo en el punto más alto visible para liberar el bronquiolo.
6. Con pinzas estériles, sostenga ligeramente el extremo libre del bronquiolo y corte cualquier tejido no deseado restante con una hoja de afeitar montada estéril. Haga una incisión transversal final a través del bronquiolo antes de que se vea cualquier ramificación para extirpar el bronquiolo de los pulmones.
7. Coloque el bronquiolo en el primer lavado DMEM/RPMI 1640. Deje el bronquiolo en el lavado y repita los pasos 1.2-1.5 para recolectar secciones adicionales de bronquiolo del mismo pulmón según sea necesario para producir suficientes secciones de tejido.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Etanol al 70% o similar para equipos de esterilización de superficies y disección de Flamin Gof
Papel de aluminio, preesterilizado en autoclave, para cubrir la tabla de cortar en la que se diseccionarán los pulmones
Mechero de bunsen
Tabla de cortar: recomendamos una tabla de plástico para permitir una fácil descontaminación con alcohol.
Nevera portátil para transportar pulmones al laboratorio
Tijeras de disección en diferentes tamaños
Medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM)
Tubos reforzados Fisherbrand de 2 mL	Termo Fisher	15545809
Cuchillo para palets grandes
Hojas de afeitar montadas
Tabla de cortar de plástico y papel de aluminio para crear una superficie de disección estéril y fácil de limpiar
Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 mediano
Selección de pinzas (se recomiendan puntas romas)
Recipientes adecuados para desechar objetos punzocortantes y pañuelos de papel contaminados, de acuerdo con las políticas de salud y seguridad de su institución.