Aislamiento del complejo de ovocitos de cúmulos porcinos: una técnica para aislar el complejo de ovocitos de cúmulos del folículo ovárico porcino para la fertilización in vitro

Resumen

Fuente: Gorczyca, G. et al., Hidrogeles de alginato degradados proteolíticamente y microbiorreactores hidrofóbicos para la encapsulación de ovocitos porcinos. J. Vis. Exp. (2020).

Este video describe la técnica para aislar el complejo cúmulo-ovocito o COC de ovarios porcinos. El AOC intacto aislado se puede utilizar para llevar a cabo la fertilización in vitro, la técnica de reproducción asistida para desarrollar tratamientos de fertilidad.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Aislamiento de complejos cúmulo-ovocito porcino

1. Con el fin de recolectar material para el aislamiento de folículos ováricos, se extrajeron ovarios porcinos de primerizas prepúberes (aproximadamente de 6-7 meses de edad, con un peso de 70 a 80 kg) en un matadero local. Elija aproximadamente 20 ovarios de cerdo de 10 animales para el aislamiento de complejos cúmulo-ovocito (COC) en cada experimento.
   nota: Suponiendo que cada ovari....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
General
Antibiótico Antimicótico (100x) 100ml	Termo Fisher	15240062	Concentración final del 2,5 % para el medio de manipulación. 1 % en PBS (paso 1.2)
DMEM/F12 (500 ml)	Sigma-Aldrich	D8062	Medio de manipulación
FCS (100 ml)	Termo Fisher	16140063	10% de concentración final para el Medio de Manejo. (paso: 1.5)
PBS (1x, pH 7.4) 500ml	Termo Fisher	10010023
Medio de maduración
hCG (1 VIAL de 10 000 U)	Sigma-Aldrich	CG10
PMSG	Proveedor biológico	RP1782721000
Instrumentos, herramientas específicas
Plato Pteri de 30 mm	TPP	93040
Placa de Petri FIV de 60 mm	halcón	353653
incubadora	Panasonic	MCO-170AIC-PE	Se pueden utilizar otras marcas
Placa de Petri estéril (10 cm)	Biotecnología NEST	704002
termo	Quechua	5602589	Se pueden utilizar otras marcas