Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Preparación animal
NOTA: Se inyectan las porciones del sistema de glándulas lagrimales orbitarias.
- Sedar a los conejos con acepromazina 0,2 mg/kg por vía subcutánea.
- Corta el pelaje en la zona periorbital y del cuero cabelludo y elimina por completo cualquier resto de pelo con Nair. Deje la piel completamente lisa para una mejor visualización de las características anatómicas y la inyección de concanavalina A guiada por ecografía (Figura 1).
- Inducir una sedación moderada como se ha descrito anteriormente.
2. Inyección de la glándula lagrimal superior orbitaria (OSLG)
NOTA: OSLG sigue en rápida sucesión.
- Aplique presión medial al globo haciendo que el OSLG sobresalga de la incisión posterior. Aplique presión medial al globo (Figura 2, flecha roja) con la protuberancia del OSLG desde la incisión posterior. La protuberancia sirve como localización macroscópica para encontrar la incisión posterior.
- Use pinzas curvas con las puntas cerradas para hacer una hendidura en el área hasta que se sienta la abertura ósea en el cráneo. Esto será como una hendidura con una dirección anterior/posterior debajo de la protuberancia.
- Aplique una presión moderada con pinzas para dejar una hendidura en la piel, que servirá como punto de referencia para la colocación de la aguja (Figura 3A).
- Inserte una aguja (jeringa de tuberculina con una aguja de calibre 27 de 5/8 de pulgada) perpendicular a la piel sobre la marca de hendidura (Figura 3B) ~ 1/4 de pulgada en la incisión, luego redirija la aguja posterior y externamente hacia el canto lateral apuntando al punto medio entre el sitio de inyección y el borde orbital óseo.
nota: Si la incisión no se dirige con precisión con la aguja, el cráneo bloquea su avance.
- Una vez alcanzado el cubo de la aguja, inyecte lentamente 1000 μg de Con A en un volumen de 0,2 mL (Figura 3C).
- Complete la inyección de PSLG y OSLG en 2-3 minutos
- Retirar al animal de la sedación con isoflurano (si aún no se ha realizado). La inyección de la glándula lagrimal inferior (ILG, por sus siglas en inglés) generalmente se puede completar sin sedación adicional.
