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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Llegada y aclimatación de los animales
- Ponga en cuarentena a los lechones de 1 a 2 días durante al menos 24 horas después de su llegada.
- Aloje a los lechones en jaulas de acero inoxidable limpias y desinfectadas (36 pulgadas x 48 pulgadas x 36 pulgadas) sobre lecho de astillas de álamo temblón y alimento ad libitum con sustituto de leche para cerdos.
- Mantenga la temperatura ambiente a 85 °F para garantizar un ambiente termoneutro.
2. Día del experimento
- Retire el alimento 2 h antes del experimento.
- Inyectar a los lechones una inyección intramuscular de ketamina (10-40 mg/kg)/xilacina (1,5-3,0 mg/kg IM) y transportarlos a través de una jaula de transporte al espacio quirúrgico.
3. Inducción y mantenimiento de la anestesia
- Administrar anestésico de inhalación de isoflurano al 4% mezclado con oxígeno por el cono nasal y confirmar que el animal está profundamente anestesiado evaluando la ausencia de reflejos palpebrales y de retirada.
- Intuble al animal colocándolo en posición supina y use un laringoscopio (hoja recta) para ayudar a guiar el tubo de intubación (diámetro de 2,5 a 2 mm) hacia la tráquea.
- Coloque al animal en el ventilador una vez que el tubo de intubación esté asegurado.
- Asegúrese de que los lechones reciban una mezcla de isoflurano (0,25 %-3 % de mantenimiento), oxígeno y óxido nitroso.
- Administre una dosis de fentanilo (10 μg/kg) y continúe administrando una dosis cada 1-2 h para garantizar una profundidad adecuada continua de analgesia y sedación y para evitar artefactos de movimiento que podrían provocar el desplazamiento del tubo endotraqueal.
- Establecer acceso intravenoso (IV) en la vena abdominal subcutánea o cualquier otra vena periférica.
- Establecer la línea arterial a través de la arteria femoral. Esto se puede hacer de forma no invasiva o realizando un corte.
4. Cirugía del plexo braquial
- Coloque al animal en posición supina sobre la mesa de operaciones después de una anestesia adecuada como se describe en la sección 3, con la extremidad superior en abducción, exponiendo la región axilar.
- Use cualquier paño quirúrgico para cubrir al animal. Utilice técnicas limpias pero no estériles.
- Exponga el complejo del plexo braquial en ambos lados de la columna vertebral haciendo una incisión en la línea media (usando una cuchilla # 10) sobre la piel y la fascia que recubre la tráquea, hasta el tercio superior del esternón, correspondiente a los niveles de la columna entre C3 y T3.
- Extrapolar la incisión con las pinzas y el hemostático horizontalmente a cada lado desde la muesca supraesternal a lo largo del borde de la clavícula hasta la parte superior del brazo, sin dejar las venas cefálicas y basilicales.
- Liberar los colgajos superior e inferior mediante disección roma con tijeras y pinzas, permitiendo el acceso a las regiones cervical y torácica del plexo braquial, respectivamente.
- Identifique el eje (C2) y la primera costilla en el T1. Usando estos puntos de referencia, identifique las tres cervicales inferiores (C6-C8) y el primer foramen vertebral espinal torácico (T1), luego examine el plexo cuidadosamente para ubicar las bifurcaciones de las divisiones (forma de M) para lograr la exposición.
- Etiquete (usando asas nerviosas) las regiones del plexo braquial por encima de estas bifurcaciones más cercanas a la columna vertebral como raíz/tronco y etiquete las que están por debajo de estas bifurcaciones como cuerdas seguidas por el nervio, que se encuentran más cerca del brazo.