Aislamiento de la aorta porcina: un procedimiento quirúrgico para extirpar la aorta torácica de cerdos miniatura para su análisis posterior

En este artículo

Resumen

Fuente: Zhao, Y., et al. Aislamiento y cultivo de células endoteliales aórticas primarias de cerdos miniatura J. Vis. Exp. (2019)

En este video, demostramos un procedimiento para la extirpación quirúrgica de la aorta de cerdos miniatura. Las células endoteliales extraídas de estas aortas aisladas pueden cultivarse posteriormente en condiciones in vitro para estudiar la coagulación y las respuestas inmunitarias.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Cirugía y preparación para el aislamiento de células endoteliales aórticas porcinas

Desinfectar el quirófano con luz ultravioleta durante 1 h y desinfectante médico líquido 84 (el contenido de cloro disponible es de 4.0% - 5.0%, Tabla de materiales) antes de realizar la cirugía.
Después de que el cerdo miniatura recibió una inyección intramuscular formada por 15 mg/kg de ketamina, 15 mg/kg de clorhidrato de xilacina y 0,05 mg/kg de clorhidrato de fenacetina (volúmenes: 100 μL/kg, tabla de materiales) (Figura 1A), confirme el estado anestésico del animal con la comprobación del estímulo doloroso porcino (p. ej., pellizcar una oreja o sacudir una extremidad anterior) y el índice fisiológico (p. ej., presión arterial, frecuencia cardíaca y respiratoria).
nota: Se podría administrar otra inyección de media dosis al cerdo si muestra signos de despertar.
Cortar el abdomen con un bisturí, exponer la vena cava inferior y, en consecuencia, inyectar heparina sódica (5.000 U, Tabla de Materiales) en la vena cava inferior con una jeringa de 5 mL.
Cinco minutos después, se inserta un catéter en la aorta abdominal para que se sangre la sangre, se corta la piel del tórax y se incide el diafragma con un bisturí y, posteriormente, se corta el ventrículo izquierdo
nota: Asegúrese de que el cerdo sea sacrificado controlando el pulso aórtico después de sangrar y cortar el corazón.
Extirpar las costillas con pinzas óseas (Tabla de Materiales) y exponer el corazón y los pulmones. Encuentre la aorta posterior al corazón y los pulmones y sujete los dos extremos. Lave la aorta una vez con tampón de lavado preenfriado: 1 solución de PBS (pH 7.4) con 1% (v/v) de penicilina/estreptomicina. (Figura 1B,C).
Corte la aorta con unas tijeras y mantenga la aorta sujeta en cada extremo. Extirpe el exceso de tejido alrededor de la aorta con pinzas y tijeras estériles. Coloque la aorta en un tubo centrífugo de 50 mL, lave la aorta con tampón de lavado preenfriado 3 veces (30 mL por lavado) y transfiera la aorta al laboratorio (Figura 1D).

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Resultados

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Figura 1: El procedimiento quirúrgico y la extirpación de la aorta de un cerdo miniatura. (A) Fotografía de un cerdo miniatura (Bama). (B) La aorta queda expuesta después de la laparotomía y la toracotomía. (C) La aorta se pinza en cada extremo. (D) La aorta se coloca en un tubo de 50 mL con tampón de lavado en frío.