Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado animal y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Preparación del conejo para la cirugía
- Anestesiar al conejo con 20-40 mg/kg de ketamina y 2 mg/kg de midazolam mediante inyección subcutánea. Administre al conejo un 1,5 % a un 3 % de isoflurano (normalmente al 2 %) durante la sedación inicial con una mascarilla. Administre una inyección de alfaxalona para mantener la anestesia a través de una inyección intramuscular de 3 mg/kg.
- Una vez anestesiado, retire la mascarilla e inserte un tubo endotraqueal con manguito, en la vía aérea y conéctelo a un ventilador. Continúe administrando isoflurano al 1,5–3%.
- Recolectar sangre de la arteria central de cualquiera de los oídos para un panel químico de referencia.
- Coloque un catéter de 22 G en la vena lateral del oído para el goteo de la solución de Ringer lactato durante todo el procedimiento quirúrgico. Alternativamente, se puede utilizar solución salina normal (cloruro de sodio al 0,9%).
- Usando la vena lateral en el oído opuesto, coloque un catéter en la vena y administre alfaxalona a 6 mg/kg/h. Aumente gradualmente el alfaxalona a 8 mg/kg/h mientras disminuye el isoflurano al 0,6% durante el período de preparación.
- Para limitar el dolor y el riesgo de infección, administre buprenorfina (0,01 mg/kg) y enrofloxacino (5 mg/kg) mediante una inyección subcutánea con una aguja de 25 G.
- Recorte el cabello en el cuello, la parte interna derecha e izquierda de los muslos y la espalda con una maquinilla (cuchilla # 40). El vello se elimina de la parte posterior para mantener el contacto con la almohadilla de conexión a tierra.
- Coloque un manguito de presión arterial en cada una de las extremidades traseras y mida la presión arterial inicial. Coloque el brazalete justo debajo de la rodilla con la sonda justo por encima del corvejón en la superficie lateral.
- Coloque al conejo en la mesa de cirugía boca arriba y frote y cubra los sitios de la cirugía. Esto incluye el cuello para el acceso a la arteria carótida y la parte interna del muslo derecho para el acceso a la arteria femoral. Realizar el exfoliante de esterilización alternando exfoliantes de clorhexidina al 2% y alcohol etílico al 70%. Repita esto tres veces, luego aplique una pulverización final con una solución de clorhexidina al 2%.
- Coloque una pelota de acero inoxidable de 3 mm que haya sido esterilizada dentro de una bolsa de polietileno de baja densidad encima de la pierna derecha (lavada) cerca de la parte superior del muslo para que sirva como referencia de tamaño durante las mediciones de angiografía. Coloque un paño estéril sobre la pierna hasta el momento de la cirugía. Deje la pelota dentro de la bolsa de plástico estéril durante la primera angiografía.
2. Angiografía
- Exponga la arteria carótida común derecha
- Haga una incisión de 4-5 cm de largo justo al lado de la tráquea con un bisturí con una hoja # 15.
- Use una disección roma para exponer la arteria carótida y abrir la incisión con pequeños retractores Weitlaner. Aísle cuidadosamente la arteria carótida de la vena yugular y el nervio vago. Por lo general, se utilizan unas tijeras Metzenbaum curvas y un hemostático curvo para mosquitos para la disección roma. Asegúrese de separar completamente la arteria carótida del nervio y la vena yugular para que las ligaduras solo ligen la arteria.
- Coloque una ligadura con una sutura de seda 4-0 en los extremos proximal y distal de la arteria expuesta. Ate el extremo distal de la carótida con un nudo de cirujano seguido de cuatro nudos cuadrados. En el extremo proximal, use un ligaloop para permitir que se apriete o afloje según sea necesario. El uso de un ligaloop colocado en el extremo proximal de la arteria expuesta puede ayudar a asegurar el introductor y el catéter.
- Administre 500 UI de heparina por vía intravenosa. Utilice aproximadamente 0,5 mL de lidocaína al 1% aplicada a lo largo de la carótida expuesta para dilatar el vaso. Un tratamiento suele ser suficiente, pero se puede repetir según sea necesario. Corte aproximadamente la mitad de la arteria carótida con un bisturí o unas tijeras de iris, luego coloque la herramienta de inserción de alambre de 4 pulgadas en la arteria.
- Alimente una guía de 0,014 pulgadas x 185 cm a través de la herramienta de inserción hasta la bifurcación aórtica en la cresta ilíaca en la aorta descendente. Retire la herramienta de inserción e inserte un catéter angiográfico de cola flexible 3F sobre el alambre.
- Avance el catéter de coleta para que quede 2 cm proximal a la bifurcación aórtica en la cresta ilíaca en la aorta descendente.
- Coloque la punta del catéter entre la séptima vértebra lumbar y la primera vértebra sacra. Pruebe la ubicación del catéter inyectando manualmente un agente de contraste de 2 a 4 ml.
- Administrar una inyección intraarterial de 100 μg de nitroglicerina a través del catéter para aumentar la vasodilatación.
- Administrar 0,8 mL de lidocaína al 1% al conejo a través del catéter para ayudar con la vasodilatación durante la angiografía. Conecte el tubo del inyector al catéter y elimine las burbujas de aire en la vía. Inyecte 8-9 mL de medio de contraste utilizando un inyector angiográfico automatizado a través del catéter.
- Registre imágenes seriadas de las extremidades traseras mediante angiografía.
- Configure el inyector de potencia para inyectar contraste a 3 mL/seg para un total de 8-9 mL. Realice una angiografía digital por sustracción a 6 fotogramas por segundo.
- Seleccione las imágenes en serie creadas y modifique una foto de cada angiografía utilizando una configuración de aproximadamente -40% para minimizar la apariencia del hueso y capturar una imagen completa de la perfusión del vaso con contraste. En la Figura 1 se muestra un ejemplo de angiografía del flujo vascular después de la ligadura/escisión de la arteria femoral.
