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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Anestesia e intubación
- Sedar a los animales (conejos blancos de Nueva Zelanda de tres meses de edad (machos o hembras), con un peso de ~2,5 kg cada uno) mediante inyección intramuscular (IM) de ketamina (25 mg/kg, 50 mg/mL, 0,5 mL/kg) + xilacina (3 mg/kg, 20 mg/mL, 0,15 mL/kg). Espere ~ 20 minutos para que los animales duerman
profundamente (atonía muscular completa).
nota: Esta premedicación permitirá un proceso de intubación sencillo, rápido e indoloro. Se induce analgesia profunda y anestesia como se describe en el paso 1.1.8.
- Coloque una cánula intravenosa (IV) en la vena marginal del oído y manténgala cerrada hasta que se complete la intubación.
nota: Esta vía intravenosa servirá para perfundir fentanilo y propofol para analgesia profunda y anestesia, respectivamente (ver paso 1.8).
- Mantener la anestesia suministrando sevoflurano al 5% en oxígeno puro hasta que se realice la intubación.
nota: Este paso es necesario solo si el animal muestra signos de despertar (movimientos oculares, contracciones musculares).
- Anestesiar la tráquea localmente rociando lidocaína al 10%. Coloca al conejo en posición prona y mantén la cabeza en extensión vertical.
- Deslice el primer tubo endotraqueal de diámetro pequeño (2,5 mm) en la tráquea del conejo hasta que se pueda escuchar el flujo de aire en el tubo. Esto abrirá la laringe y facilitará la inserción de la trompa definitiva.
- Inserte una guía (catéter de intubación) en el tubo para fijar la posición del tubo en la tráquea. Retire el tubo de pequeño diámetro y deslice el tubo endotraqueal definitivo (4,9 mm) sobre la guía.
- Retire la guía e infle el globo en el extremo del tubo endotraqueal para sellar y bloquear el dispositivo en la tráquea. El tubo permanecerá en su lugar, pero se puede asegurar usando un cordón atado alrededor de la frente. Ventilar inmediatamente (7 mL/kg, frecuencia de 40/min) al animal con sevoflurano al 3% en oxígeno puro.
- Perfundir continuamente (vena del oído) fentanilo (0,01 mg/mL, 2-4 mL/h) para inducir analgesia, 2-4 mg/kg de (2%) propofol (20 mg/mL, 4-8 mL/h) para inducir la anestesia y 4 mL/kg/h de acetato de Ringer para mantener las condiciones isovolumétricas.
- Coloque una sonda de temperatura rectal. También controle la función cardíaca, la temperatura y la saturación de oxígeno durante todo el proceso.
- Controle la profundidad de la anestesia monitoreando la respiración autónoma; si el animal muestra signos de respiración autónoma, dispense un pequeño bolo de propofol y fentanilo.