Generación de un modelo de defecto del calvario del conejo: un procedimiento quirúrgico para crear defectos redondos en la parte superior del cráneo del conejo para evaluar las capacidades de regeneración ósea de los materiales sustitutos óseos

Resumen

Fuente: Marger, L. et al., Calvarial Model of Bone Augmentation in Rabbit for Assessment of Bone Growth and Neovascularization in Bone Substitution Materials. J. Vis. Exp. (2019).

En este video, describimos el procedimiento quirúrgico para generar un modelo de calvarial de conejo para evaluar las capacidades de regeneración ósea de materiales de sustitución de muestras óseas de interés.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Cirugía

1. Preparación del sitio
   1. Coloque al conejo sobre una almohadilla térmica (39 ° C) cubierta por una almohadilla de colchón (para evitar quemaduras) sobre la mesa de cirugía. Afeita el cuero cabelludo.
   2. Aplicar un gel lubricante en los ojos para evitar la irritación y la sequedad. Desinfectar el sitio frotando la piel con povidona yodada (10%). Luego, cubre al conejo con un paño quirúrgico estéril y corta un área de acceso para el cráneo.
   3. Desinfectar el sitio quirúrgico con povidona yodada (10%) por segunda vez. Aplicar un gel lubricante en los ojos para evitar la irritación y la sequedad.
   4. Prepare una mesa cubierta (paño estéril) sobre la cual colocar la bandeja quirúrgica completa.
2. Apertura del centro quirúrgico
   1. Anestesiar localmente con una inyección subcutánea (SC) de lidocaína al 2% (1 mL) en el cráneo.
   2. Incisión a través de la piel (con un bisturí) a lo largo de la línea sagital de la pantorrilla, desde las órbitas hasta la protuberancia occipital externa (~4 cm de longitud). Asegúrese de que el periostio esté inciso.
   3. Eleve suavemente el periostio (con un elevador perióstico) a ambos lados de la incisión. Enjuague el sitio con solución salina estéril.
3. Colocación de cilindros
   1. Localice las suturas mediana y coronal en el cráneo (Figura 2A, B). Nótese que estas líneas anatómicas forman una cruz. Los cilindros se colocarán en cada uno de los cuadrantes definidos por la cruz, asegurándose de que el borde del cilindro no quede sobre la sutura (Figura 2C).
   2. Coloque el primer cilindro en el cuadrante superior izquierdo (hueso frontal izquierdo) e intente colocar el dispositivo plano. Fije en la posición con una fuerte presión manual y atornille un microtornillo, hasta que se sienta resistencia. Asegúrese de que la cabeza del tornillo esté al ras con la superficie de la lengüeta del cilindro.
   3. Repita el mismo procedimiento en la otra lengüeta para fijar el cilindro firmemente en el cráneo. Asegúrese de que el cilindro esté herméticamente fijado al hueso.
   4. Repita el procedimiento en el cuarto superior derecho (hueso frontal derecho), el cuarto inferior izquierdo (hueso parietal izquierdo) y el cuarto inferior derecho (hueso parietal derecho).
4. Perforación ósea de 5 orificios intramedulares dentro del área circunscrita por los cilindros (Figura 1)
   1. Taladre un orificio intramedular bajo irrigación salina (0,8 mm de diámetro, ~1 mm de profundidad) con una fresa redonda en el hueso, en el centro del área circunscrita por el cilindro. Asegúrese de que aparezca el sangrado.
   2. Taladre dos orificios intramedulares más a lo largo del eje que pasa a través de los dos tornillos de lengüeta, en los bordes internos del cilindro. A lo largo del eje perpendicular, taladre dos orificios intramedulares más en los bordes internos del cilindro. Asegúrese de que aparezca el sangrado.
   3. Repita la operación dentro de los otros tres cilindros.
5. Llenado de cilindros con muestras de material y taponado (Figura 3)
   1. Prepare el material de sustitución ósea deseado de acuerdo con las instrucciones del fabricante o las especificaciones del material.
   2. Llene el primer cilindro hasta el borde con la muestra de material y cierre el cilindro colocando la tapa. Repite el proceso en los otros 3 cilindros.
6. Cierre del sitio quirúrgico
   1. Cierre la piel por encima de los cilindros con una sutura intermitente no reabsorbible.
   2. Aplique un apósito pulverizable sobre la herida.

2. Tratamiento postquirúrgico

1. Suspender el suministro de analgesia y anestesia (propofol y fentanilo, perfusión detenido) y comprobar la recuperación de la respiración autónoma.
2. Detener la ventilación una vez que el animal haya recuperado la respiración autónoma. Mantenga al animal bajo oxígeno puro antes de despertar por completo.
3. Inyectar clorhidrato de buprenorfina SC (0,02 mg/kg, 0,03 mg/mL, 0,67 mL/kg) y repetir la inyección cada 6 h durante 3 días como analgesia postquirúrgica.
4. Transfiera al animal a su alojamiento habitual con agua y alimentación completa.

Resultados

Figura 1: Especificaciones de los cilindros de PEEK. Se perforaron dos orificios (0,8 mm de diámetro) en las lengüetas estabilizadoras laterales para atornillar. Las posiciones de los 5 orificios intramedulares (0,8 mm de diámetro) que se perforarán en el cráneo dentro del área delimitada por el cilindro están marcadas con círculos rojos.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Drogas
fentanilo	Bischel		Para la analgesia
Ketalar 50mg/ml	Pfizer		Ketamina para la anestesia
Lidohex	Bichsel		Gel lubricante para los ojos
Opsite	Smith y su sobrino	66004978	Apósito pulverizable
Povidona yodada 10%, Betadine	Mundipharma		Agente antiinfeccioso
Propofol 2%	Braun	3538710	Para la anestesia
Rapidocaína 2%	sintetica		Anestesia local
Rompun 2%	Bayer		Xilacina para anestesia
Sevoflurano 5%	Abbvie		Para la anestesia
equipo
Fresenius Vial piloto C	Imexmed		Bomba de infusión
Almohadilla térmica	Aparato de Harvard
Succión dominante 50	Medela
Tubo de aspiración Optimus	Promédico	80342.2
Motor quirúrgico	Schick dental	Qube	Perforación de orificios intramedulares
Ventilación	Maquet Servo1
material
Cilindros y tapones	Boutyplast	Personalizado	composición: PEEK (poli éter éter cetona)
Eje de retención manual	GlobalD	ACT1K
Empuñadura móvil para eje de retención automática	GlobalD	Mtm
Tornillos autoperforantes	GlobalD	VA1.2KL4	tornillos de accionamiento transversal de titanio grado 5, ISO 5832-3
Bandeja quirúrgica
Tubo endotraqueal Shiley diámetro 2,5mm	Covidien	86233	Para la intubación
Tubo endotraqueal Shiley diámetro 4,9mm	Covidien	107-35G	Para la intubación
Ethicon prolene 4-0	Ehticon	8581H	Sutura no reabsorbible
fórceps	Marcel Blanc	BD027R	145 milímetros
Catéter de intubación	Cocinero médico		Guía para la intubación
Fresas quirúrgicas redondas	Patterson	78000	0,8 mm de diámetro, Perforación de orificios intramedulares
escalpelo	Swann-Morton		N°10 y N°15
tijeras	Marcel Blanc	Artículo 657	180 milímetros
Jeringas Omnifix	Braun	4616057V	5 ml, 10 ml y 50 ml
Venflon G22	Braun	42690985-01	Vasofix seguridad para la línea intravenosa de oído