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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado animal y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Preparación de modelos de infección ósea
- Mantenga conejos blancos machos de Nueva Zelanda, de 3 meses de edad, en jaulas individuales, en condiciones de aire controlado (20 ± 1 °C) y ciclos de iluminación de luz-oscuridad de 12 h/12 h. Ofrezca una dieta de rutina y agua del grifo todos los días.
- Asegúrese de que en el momento de la cirugía el conejo pese más de 3 kg.
- Anestesiar conejos mediante inyección intraperitoneal con pentobarbital sódico (3 mg por 100 g de peso corporal). Asegúrese de que los conejos estén completamente anestesiados por la falta de respuesta a un pellizco en la pata. Fije los conejos en la mesa de operaciones durante el procedimiento de operación.
NOTA: Asegúrese de que la duración del procedimiento de modelado sea inferior a 1 hora.
- Afeita la región proximal de la tibia con una afeitadora eléctrica en sentido contrario al crecimiento del vello. Desinfectar la piel aplicando una solución de povidona yodada.
- Marque el extremo superior de la tibia y la posición del orificio de perforación para la inyección con S. aureus (la distancia al extremo superior de la tibia es de 1,5 cm) con un bolígrafo y una regla. Asegúrese de que las posiciones de los orificios de perforación estén en el medio de la meseta tibial horizontalmente (Figura 1A).
- Corte la piel de la tibia con un bisturí n.º 11 y haga una incisión de 1 cm en el periostio (Figura 1B, C). Perfore un orificio de 2 mm de diámetro en la tibia con una unidad de fresa ósea eléctrica (Figura 1D).
- Presione los orificios de 2 mm de diámetro en la meseta tibial con un cilindro de cera ósea de 2 mm de diámetro y 2 mm de altura (Figura 1E). Retire la cera de hueso de repuesto a lo largo del plano horizontal de la meseta tibial (Figura 1F). Verifique que el orificio de 2 mm esté lleno de cera de hueso (Figura 1G).
nota: Asegúrese de que los orificios estén llenos de cera ósea revisando el orificio con o sin desbordamiento de sangre.
- Coser el periostio y la piel con sutura quirúrgica reabsorbible en una sutura vertical de colchón para evitar que el animal mastique las suturas (Figura 1H).
- Inyecte 1 x 108 UFC/mL de soluciones de S. aureus (30 μL por 100 g de peso corporal) con un inyector de asepsia de 1 mL (Figura 1I). Asegúrese de que las agujas penetren en la cera ósea e inyecte lentamente la solución de S. aureus en la médula ósea.
- Mantenga al animal en condiciones cálidas y limpias para evitar la pérdida de calor después del modelado. Controle la frecuencia respiratoria y la frecuencia cardíaca. Después de despertarse, aloje a los conejos en jaulas individuales con libre acceso a comida y agua.
