Descongelación de embriones de conejo: un procedimiento de calentamiento para recuperar embriones de conejo criopreservados para la transferencia de embriones

Resumen

Fuente: García-Domínguez, X. et al., Transferencia embrionaria mínimamente invasiva y vitrificación embrionaria en la etapa embrionaria óptima en un modelo de conejo. J. Vis. Exp. (2019)

Este video muestra el procedimiento para descongelar embriones de conejo vitrificados y los pasos de medición de precaución para una recuperación óptima del embrión.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Calentamiento de embriones

1. Descongela los embriones en un solo paso.
   1. Coloque la minipaja horizontalmente a 10 cm del vapor de nitrógeno líquido durante 20-30 s.
   2. Cuando comience el proceso de cristalización dentro de la minipajita, sumérjala en un baño de agua a 25 °C durante 10-15 s.
   3. Retire el tapón de minipaja y corte el tapón de algodón.
   4. Con un microdosificador acoplado, expulse todo el contenido de ministraw en una placa que contenga una solución >nota: Este paso debe realizarse rápidamente para reducir la exposición del embrión a la solución de vitrificación.
   5. Mueva los embriones a una nueva placa que contenga solución de BM durante otros 5 minutos.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
nitrógeno líquido	Air Liquide	P1505XXX
Placas de Petri, 35 mm	Sigma Aldrich	CLS430165-500EA
Apósito de plástico (Nobecutan)	IBOR medica	7140028
Pajita de plástico 0,25 mL	IMV - tecnologías	6431
tijeras	ROBOZ	RS-5880	Cualquier tijera recta pequeña de acero de grado quirúrgico regular funcionará.
Guantes estériles	Alvet Escartí	087GL010075
Bata estéril	Alvet Escartí	12261501
Mascarilla estéril	Alvet Escartí	058B15924B
Tapón de paja	IMV - tecnologías	6431
sacarosa	Sigma Aldrich	S7903
Baño de agua	RAYPA	BAE-4
Solución salina tamponada con fosfato (DPBS) de Dulbecco	Sigma Aldrich	D5773	Sin cloruro cálcico.