Entrega de genes basada en virus adenoasociados recombinantes: una técnica para la administración de transgenes y la expresión específica del corazón en modelos de roedores

Resumen

Fuente: Ding, J. et al. Preparación de rAAV9 para sobreexpresar o derribar genes en corazones de ratón. J. Vis. Exp. (2016)

En este video, demostramos la entrega de genes basados en virus adenoasociados recombinantes en la cría de ratón. Este método ayuda a estudiar la expresión génica en las células objetivo.

Protocolo

>1. Tratar ratones neonatos con rAAV9 en P0.5-P2.5 mediante inyección subcutánea.

1. Rellene previamente una jeringa de insulina 29G1/2 de 0,33 x 12,7 mm con la solución recombinante del virus adenoasociado 9 (rAAV9). Tenga cuidado de eliminar las burbujas de aire.
2. Sostenga al cachorro crioanestesiado en una mano con el pulgar y el índice. Antes de la inyección, deslice la piel posterior del cachorro con un hisopo saturado con alcohol isopropílico al 70% para mantener la condición estéril. Inserte la aguja de la jeringa en el subcutis dorsal anterior del animal en un ángulo de 5 a 10°. Inyecte 50-70 μl de la solución rAAV9 con la jeringa de insulina.
   NOTA: rAAV9 también puede administrarse al ratón mediante inyección intraperitoneal o intravenosa. Se puede obtener una expresión eficiente de los genes entregados en el corazón. Sin embargo, la inyección intraperitoneal a veces puede dar lugar a una expresión permeable en el hígado. Después de la inyección, se monitoreó el estado de las crías todos los días.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Vector rAAV9	Núcleo vectorial de Penn	Pág. 1967