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1. El método de la cápsula para la inactivación en biocontención con glutaraldehído al 2%, seguido de tinción negativa en un laboratorio BSL-2
- Procedimiento de inactivación de virus.
- Dentro del BSC de biocontención, mezcle bien la suspensión del virus con el mismo volumen de glutaraldehído al 4% para lograr una concentración final de glutaraldehído al 2%
cautela: El glutaraldehído es un producto químico peligroso y requiere una protección adecuada. El glutaraldehído se puede usar durante períodos breves en un BSC normal, pero el reactivo abierto prolongado requiere trabajar en un BSC con conductos o en una campana de gases químicos.
- Inactive los virus con fijador durante un mínimo de 24 horas antes de empaquetarlos, descontaminarlos y transfiéralos a las instalaciones BSL-2 EM.
- En la instalación BSL-2 EM, aspire el virus y la mezcla fijadora en la cápsula, que contiene dos rejillas TEM, unidas a una pipeta.
- Coloque la pipeta horizontalmente durante 10 min con las rejillas orientadas horizontalmente.
nota: Esto es para promover una distribución uniforme de las partículas de virus en las rejillas TEM.
- Tome la pipeta y presione el émbolo para expulsar el virus a un contenedor de residuos. Aspire 40 μL de agua dI en las cápsulas y explíquela en el contenedor de residuos durante 3 ciclos de enjuague.
- Aspire 40 μL de acetato de uranilo (UA) al 1% o ácido fosfotúngstico de potasio (PTA) al 1% en las cápsulas durante 30 s.
nota: El tiempo de tinción varió de 10 s a 1 min según la muestra de virus.
cautela: El UA es un emisor alfa y una toxina acumulativa. Manéjelo con la protección adecuada.
- Retire la cápsula de la pipeta y seque las rejillas tocando el borde de las rejillas con un trozo de papel de filtro. Seque las rejillas al aire y guárdelas para la posterior obtención de imágenes TEM.