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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Tinción con azul de toluidina
- Prepare una solución al 1% de azul de toluidina disolviendo 2 g de borato de sodio en 100 ml de agua desionizada, luego agregue 1 g de azul de toluidina y revuelva hasta que se disuelva. Filtre la solución con papel de filtro (tamaño de poro: 11 μm) y mantenga la solución en un frasco opaco a temperatura ambiente durante un máximo de dos semanas.
- Con una pipeta de plástico o una micropipeta, añada una gota de solución de azul de toluidina en la parte superior de las secciones nerviosas y déjela actuar durante 20-30 s.
- Enjuague todo el exceso de solución azul de toluidina sumergiendo suavemente los portaobjetos en un frasco de agua desionizada y repita 3-4 veces hasta que las secciones estén claras. Seque los portaobjetos al menos 15 minutos a 60 °C o toda la noche a temperatura ambiente y luego cubra las secciones con un cubreobjetos utilizando un medio de montaje habitual. Examine los portaobjetos montados inmediatamente o guárdelos a temperatura ambiente.
- Examinar bajo un microscopio óptico. Se recomienda una lente de inmersión en aceite 100X para obtener imágenes detalladas que se utilizan para calcular las relaciones g.