$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Preparación de muestras para la microdisección por captura láser
- Prepare soluciones para las manchas y la deshidratación.
- Coloque 45 mL de etanol al 80% en cada uno de los tres tubos de centrífuga de 50 mL sobre hielo. Etiquétalos como #1, #2 y #3. Etanol diluido con agua libre de RNasa/DNasa.
- Coloque 45 mL de etanol al 95% en un tubo de centrífuga de 50 mL sobre hielo.
- Coloque 45 mL de etanol 100% en un tubo de centrífuga de 50 mL sobre hielo.
- Coloque 45 mL de xileno en un tubo de centrífuga de 50 mL a temperatura ambiente.
PRECAUCIÓN: El xileno debe usarse en una campana extractora.
- Descongele brevemente un portaobjetos de membrana PEN colocándolo contra una mano enguantada, luego lave dos veces durante 30 s cada uno en 45 mL de etanol al 80% (# 1 y # 2) con agitación en tubos de centrífuga de 50 mL para eliminar el OCT.
NOTA: Es importante eliminar la OCT antes de teñir, para evitar que la OCT aflojada durante la tinción oscurezca las secciones. Se pueden utilizar fórceps para facilitar la extracción de la OCT que no se lava con agitación.
- Coloque la corredera sobre una hoja de papel de aluminio. Pipetear 0,8 mL de violeta de cresilo al 0,1% en etanol al 50% en el portaobjetos y teñir durante 30 s. Lave el portaobjetos en 45 mL de etanol al 80% (#3) durante 30 s, y luego deshidrate al paso de 30 s cada uno a través de 45 mL de etanol al 95%, etanol al 100% y xileno en tubos de centrífuga de 50 mL.
- Coloque los deslizamientos sobre un limpiador de trabajo delicado durante 5 minutos para drenar el xileno y secar las secciones.