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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Tinción y corte de cerebro
- Después del experimento de oclusión de la arteria cerebral media, extraiga el cerebro, incluido el tronco encefálico, del cráneo y lávelo con PBS helado.
- Elija el tamaño correcto de la matriz de acero inoxidable del cerebro (consulte la Tabla de Materiales) en función del peso de los animales (Figura 1B). Coloque el cerebro con su lado ventral hacia arriba en la matriz cerebral.
nota: Cuando se asienta en la matriz, la superficie ventral del cerebro debe ser paralela a la superficie superior del molde.
- Con cuchillas, restrinja las partes frontal y caudal (2 cuchillas de ambos lados) del cerebro><.
nota: Se deben utilizar hojas de afeitar compatibles con la matriz de corte. En general, se puede usar una hoja de afeitar compatible de un solo filo (grosor de hasta 0,01 pulgadas (0,254 mm)) para cortar el cerebro de rata.
- Coloque las cuchillas parcialmente (sin cortar completamente el cerebro) en los canales entre la primera y la última cuchilla. Cuando todas las cuchillas estén insertadas y dispuestas en paralelo, presione todas las cuchillas hacia abajo con la palma de la mano al mismo tiempo para cortar el cerebro en rodajas coronales de 2 mm.
- Sujete las cuchillas firmemente a lo largo de los lados con dos dedos y retírelas junto con el cerebro cortado de la matriz.
- Coloque las rodajas de cerebro una a una en una bandeja (70 mL, 72 x 72 mm). Al organizar las rebanadas, asegúrese de que la superficie anterior de cada rebanada esté siempre hacia arriba.
- Vierta una solución tibia (+37 °C) de TTC al 1% en PBS sobre las rodajas de cerebro e incube durante 8 minutos a 37 °C en la oscuridad.
nota: Las rodajas de cerebro deben sumergirse completamente en la solución de TTC durante la incubación.
- Después de la incubación en una solución de TTC al 1%, transfiera los trozos de cerebro a la bandeja de plástico azul para capturar imágenes. Coloque los cortes de cerebro en orden secuencial desde la parte frontal hasta la caudal y use un bisturí para separar los hemisferios en el plano sagital.
