Ensayo de tinción de Giemsa para la formación de colonias: un procedimiento de tinción in vitro para evaluar la capacidad proliferativa de las células madre mesenquimales

Resumen

Fuente: Schlaefli, P. et al. Un método enzimático para rescatar células madre mesenquimales de muestras de médula ósea coaguladas. J. Vis. Exp. (2015)

En este video, demostramos el procedimiento de tinción de Giemsa para evaluar el potencial proliferativo de las células madre mesenquimales para formar colonias viables. La tinción de Giemsa es una tinción neutra compuesta principalmente por colorantes azules y eosinas, que tienen afinidad selectiva por los componentes celulares en función de su carga.

Protocolo

1. Siembra para cultivo de células de expansión y placas CFU

1. Resuspender las células (formadas por eritrocitos y células mononucleares) en 50 ml de medio basal: Alpha-MEM suplementado con un 10% de suero fetal bovino (FBS), 100 U/ml de penicilina, 100 mg/ml de estreptomicina y 2,5 mg/ml de anfotericina B. Contar las células diluidas 1:10 en una solución de Azul de Trypan utilizando una cámara de Neubauer.
2. Colocar las células en matraces de cultivo celular a una densidad de 5 x 10⁷ células/cm² e incubar en una incubadora humidificada a 37 °C. Si está disponible, use condiciones hipóxicas (5% de oxígeno). Para el control del ensayo....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Componentes del medio basal
PenStrep 100X	Gibco	15140122
FGF humano-básico	Peprotech	100-18B
MEM Alfa con nucleósido, con glutamina estable	Amimed	1-23S50-I
FBS Calor inactivado	Amimed	2-01F36-I
Anfotericina B	Applichem	Año 1907
genérico
Pbs	Applichem	964.91
Tinte de Giemsa	Applichem	A0885
Consumibles
Plato de curtura de células primarias	halcón	353803
Matraz de cultivo celular - Matraz T300	TPP	90301
equipo
Pipeta Serológica Stripettes 5ml	Corning	4487-200EA
Incubadora humidificada Heracells 240	Termo científico	51026331
Heraeus Multifuge 1S-R	Termo científico	75004331