Tinción con azul alcián para visualizar proteoglicanos: una técnica para detectar proteoglicanos en cultivo in vitro de condrocitos diferenciados con células madre mesenquimales

Resumen

Fuente: Schlaefli, P. et al., Un método enzimático para rescatar células madre mesenquimales de muestras de médula ósea coaguladas. J. Vis. Exp. (2015).

Este video describe el procedimiento de tinción con azul alcián para localizar los proteoglicanos secretados por condrocitos funcionales. Este método ayuda a determinar el éxito de la diferenciación in vitro de células madre mesenquimales en condrocitos maduros.

Protocolo

NOTA: Los aspirados de médula ósea canina de la cresta ilíaca se recolectaron con el consentimiento del dueño del perro. Los aspirados de médula ósea canina (aprox. 10 ml) se anticoagularon mediante la adición de 15 ml de citrato de sodio al 3,8% inmediatamente después de la retirada en el quirófano. Las muestras se transfirieron al laboratorio para su procesamiento el mismo día de su retirada.

>1. Preparación de la uroquinasa (antes del^1er uso)

1. Reconstituya la uroquinasa con solución salina estéril tamponada con fosfato (PBS) de acuerdo con las instrucciones del fabricante: Añada 10 m....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Componentes del medio basal
PenStrep 100X	Gibco	15140122
FGF humano-básico	Peprotech	100-18B
MEM Alfa con nucleósido, con glutamina estable	Amimed	1-23S50-I
FBS Calor inactivado	Amimed	2-01F36-I
Anfotericina B	Applichem	Año 1907
Componentes del medio adipogénico
DMEM-HAM F12 + GlutaMAX	Amimed	1-26F09-I
Componentes del medio condrogénico
Biopad - dispositivo médico con forma de esponja	Euroresearch
L-prolina	sigma	P5607
Insulina-Transferrina-Selenio X	Gibco	51500056
Factor de crecimiento transformador humano-β1	Peprotech	100-21
Azul Alcián 8GX	sigma	A3157
Rojo rápido nuclear	sigma	N8002
Genérico Tri-Sodium Citrato dihidratado	Applichem	A3901
Pbs	Applichem	964.91
Ácido sulfúrico (H2SO4)	Applichem	A0655
Dimetilsulfóxido (DMSO)	Applichem	A1584
Cloruro de magnesio (MgCl2)	Applichem	A3618
Clorhidrato de guanidina	Applichem	A1499
Consumibles
Tubo de reacción de 50 ml	Axygen	SCT-50ML-25-S
Jeringa de 10 ml	Braun	4606108V
Aguja estéril (22G)	Braun	4657624
Microtubos de 1,7 ml	Brunschwig	MCT-175-C
Filtro de células de 100 μm	halcón	6.05935
pinzas estériles	Bastos Viegas, S.A.	489-001
bisturí estéril	Braun	5518059
Plato de curtura de células primarias	halcón	353803
C-Chip Neubauer mejorado	Bioswisstech	505050
matraz para cultivo celular - Flask T300	TPP	90301
equipo
Cabina de bioseguridad microbiológica clase II	Skan	82011500
Baño de agua	Memmert	1305.0377
Pipeta Serológica Stripettes 5ml	Corning	4487-200EA
microscopio	Olimpo	CKX41
incubadora humidificada Heracells 240	Termo científico	51026331
Heraeus Multifuge 1S-R	Termo científico	75004331