Tinción de Papanicolaou: una técnica para visualizar las características citológicas de las células tubáricas

Resumen

Fuente: Chen, H. et al. Citología tubárica de la trompa de Falopio como herramienta prometedora para la detección precoz del cáncer de ovario. J. Vis. Exp. (2017).

En este video, demostramos un protocolo modificado de tinción de Papanicolaou para estudiar la citología tubárica. Esta técnica se puede utilizar para visualizar las características citológicas de las células epiteliales malignas y no malignas de las trompas de Falopio.

Protocolo

1. Protocolo de tinción de Papanicolaou modificado

1. Tiñir los portaobjetos frotados de tejido ejecutando el procedimiento automatizado de tinción no ginecópico, como se ilustra en la Tabla 1.
   NOTA: El método de tinción representa una modificación de la técnica de tinción de Papanicolaou que utilizamos habitualmente para muestras no ginecológicas. Utilizamos un procesador de tejidos automatizado para teñir algunos portaobjetos. En este estudio, elegimos el procedimiento de tinción no ginecológica en lugar del procedimiento de tinción ginecológica. La eosina utilizada es EA-65, en lugar de la EA-50 utilizada para muestras ginecológicas (muestra de prueba de Papanicolaou). Además, OG-6 en el procedimiento de tinción ginecológica, que es principalmente para la tinción de células escamosas, no se incluye en el procedimiento de tinción ya que no se espera que se observen células escamosas en este estudio. EA65 (Eosin Azure) es una solución antimanchas compuesta por 3 colorantes: Eosin Y, Fast green FCF y Bismarck brown Y. El procedimiento se ilustra en la Tabla 1.
2. Realice un procedimiento manual rápido de tinción de Papanicolaou de la siguiente manera:
   1. Sumerja el portaobjetos untado de tejido en etanol al 95%, 10 veces, y cada inmersión tarda aproximadamente 1 s.
   2. Sumerja el portaobjetos en H₂O, 10 veces, y cada inmersión dura aproximadamente 1 s.
   3. Eche el portaobjetos en hematoxilina durante 10 - 60 s.
   4. Sumerja el portaobjetos en H₂O, 10 veces, y cada inmersión dura aproximadamente 1 s.
   5. Sumerja el portaobjetos en etanol al 95%, 10 veces, y cada inmersión dura aproximadamente 1 s.
   6. Emerge del portaobjetos en EA65 durante 1 - 3 min.
   7. Sumerja el portaobjetos en H₂O, 10 veces, y cada inmersión dura aproximadamente 1 s.
   8. Sumerja la corredera en etanol al 95%, 10 veces, y cada inmersión dura aproximadamente 1 s.
   9. Sumerja el portaobjetos en xileno hasta que el portaobjetos se vuelva transparente.
      NOTA: Este es un procedimiento de tinción de Papanicolaou modificado. Este método se utiliza como un método de tinción más rápido para casos con tiempo o espacio limitados, como la aspiración con aguja fina en el sitio y las muestras STAT. Este procedimiento proporciona una tinción de calidad comparable a la del procedimiento automatizado de tinción no ginecológica. El procedimiento se ilustra en la Tabla 2.

Tabla 1: Pasos de tinción no ginecológicos.

95% Etanol	5 minutos
H2O	10 segundos
hematoxilina	15 segundos - 3 minutos
H2O destilado	5 minutos
95% Etanol	30 segundos
EA65	2 - 5 minutos
95% Etanol	30 segundos
95% Etanol	30 segundos
100% Etanol	30 segundos
100% Etanol	30 segundos
xileno	30 segundos
xileno	5 minutos

Tabla 2: Pasos manuales de la tinción rápida de Papanicolaou.

95% Etanol	10 salsas
H2O	10 salsas
hematoxilina	10 segundos-1 minuto
H2O destilado	10 salsas
95% Etanol	10 salsas
EA65	1 - 3 minutos
95% Etanol	10 salsas
100% Etanol	10 salsas
xileno	Sumerja hasta que esté claro

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Mancha de Papanicolaou, EA 65	Sigma Aldrich	HT40432
95% Etanol	Sigma Aldrich	652261
100% Etanol	Sigma Aldrich	493538
xileno	Sigma Aldrich	214736
hematoxilina	Sigma Aldrich	H9627