Tinción tricrómica de Masson Goldner: una técnica para visualizar el colágeno en secciones del corazón para la detección de la fibrosis cardiovascular

Resumen

Fuente: Valentin, J., et al. Cuantificación histológica del infarto crónico de miocardio en ratas. J. Vis. Exp.(2016).

Este video demuestra la tinción diferencial de fibras de colágeno, núcleos y citoplasma en el tejido cardíaco para visualizar el crecimiento fibrótico asociado con patologías cardíacas.

Protocolo

1. Tinción tricrómática de Masson-Goldner

1. Hacer secciones de tejido a partir de bloques de corazón incrustados en parafina con un micrótomo manual (grosor: 5 μm).
2. Teñir un portaobjetos de cada parte del corazón para cada rata (3 - 4 secciones transversales por portaobjetos) con tinción tricrómica de Masson-Goldner.
   1. Derretir los portaobjetos a 60 °C en un horno. Bajo una campana extractora, desparafinarlos en xilol dos veces durante 10 minutos cada uno. Rehidrátelos en etanol al 100%, etanol al 95%, etanol al 70% y agua destilada durante 3 minutos cada uno.
   2. Fíjalos en la solución de Bouin durante la noche. Luego, enjuáguelos con agua corriente del grifo durante 10 a 15 minutos. Enjuágalos con agua destilada. Intervuélvelos en hematoxilina de Mayer durante 3 min.
   3. Retira los portaobjetos y déjalos en agua destilada durante 5 min. Luego, incubarlos en ácido Fuchsin-Ponceau durante 5 min. Enjuágalos con ácido acético al 1% durante 1 min.
   4. A continuación, incubarlos en ácido fosfomolíbdico Naranja G durante 1 min. Enjuagarlos con ácido acético al 1% durante 1 min, incubarlos en tinte verde claro durante 10 min. Y enjuagarlos con ácido acético al 1% durante 1 min.
   5. Deshidratarlos en etanol al 70% (30 seg), etanol al 95% (30 seg) y etanol al 100% (5 min). Ponga una gota de un medio de montaje resinoso en las secciones de tejido, cúbralas con cubreobjetos y déjelas secar.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Hematoxilina Mayer	MHS32-1L	Sigma Aldrich
Ácido Fucsina CI 42685	F8129-50G	Sigma Aldrich
Ponceau Xilidina CI 16150	P2395-25G	Sigma Aldrich
Orange G CI 16230	O3756-100G	Sigma Aldrich
Verde claro CI 42095	L5382-25G	Sigma Aldrich
Xilol	10315083	Honeywell
Absoluto de etanol	10303990	Honeywell
Microscopio estereoscópico	SM2800	Nikon
Formaldehído	99340	Reactolab
Incrustación de casete	K113.1	Carl Roth
Software de medición de imágenes Bersoft		Bersoft.com	Software con licencia