Método de doble tinción: una técnica para visualizar las interacciones planta-hongo utilizando rojo de rutenio y azul de algodón con lactofenol

Resumen

Fuente: Marques, J. P. R., y Nuevo, L. G. Método de doble tinción para detectar pectina en la interacción planta-hongo. J. Vis. Exp. (2022).

Este video muestra un método de tinción doble utilizando rojo de rutenio y azul de algodón con lactofenol para visualizar pectinas y quitinas durante las interacciones planta-hongo en una planta de roya del café. El procedimiento ayuda a comprender los mecanismos de defensa de las plantas durante las infecciones fúngicas.

Protocolo

1. Proceso de doble tinción

1. Comience con secciones de hojas ultradelgadas e incrustadas en resina de Coffee arabica cv. Catuaí infectadas con roya del café. Cubrir las secciones con 2 mL de azul de algodón al 5% en lactofenol (40% glicerol, 20% fenol y 20% ácido láctico en agua) y calentarlas en una placa caliente a 45 °C durante 5 min (Figura 1A).
2. Retire el exceso de tinte lavando el portaobjetos tres veces en un vaso de precipitados lleno de agua destilada (Figura 1B-D).
3. Teñir con 2 mL de rojo rutenio al 0,01% en agua durante 1 min (Figura 1E).
4. Retire el exceso de tinte lavando el portaobjetos tres veces en un vaso de precipitados lleno de agua destilada (Figura 1F, G).
5. Ponga una gota de agua destilada sobre las secciones y cubra las secciones con un cubreobjetos de 24 mm x 60 mm para realizar análisis de microscopía óptica.

Resultados

Figura 1: Detalles de los pasos individuales del protocolo de doble tinción. (A) Cubrir las secciones con gotas de lactofenol azul de algodón y calentar los portaobjetos en una placa caliente a 45 °C. (B-C) Eliminar el exceso de tinte lavando en agua destilada. (D) Secciones en el vidrio se desliza después del lavado (indicadas por flechas). (E) Cubra las secciones ...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Placa calefactora	Dubesser	SSCD25X30-110V	tinción
Algodón Azul Lactofenol	Metaquímica	70SOLSIG024629	tinción
microscopia	Zeiss	#490040-0030-000	Captura de imágenes
Bandeja de plástico para moldeo	ems	10176-30	tinción
Rojo rutenio	LABHouse	#006004	tinción
Software Axion Vision	Zeiss	#410130-0909-000	Captura de imágenes