Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Cuantificación de la fibrosis tisular
- Coloque el tejido cardíaco fijado con paraformaldehído en un dispositivo de sección de tejido y corte secciones de 2 mm de grosor. Coloque las secciones de tejido en un casete de incrustación. Deshidrate el tejido a través de una serie de baños de alcohol graduados (50%, 75%, 95% y 100% durante 1 hora cada uno).
- Infiltrar el tejido con xileno durante 1 hora y finalmente en cera durante 1 hora. Coloque el tejido infiltrado en un casete de inclusión e incruste con cera de parafina. Almacene los tejidos incrustados en bloques de parafina a temperatura ambiente hasta el microtomo.
- Corta el tejido incrustado en secciones de 4 μm de grosor. Colocar las secciones en un baño maría a 45 ºC. Sumerja un portaobjetos de vidrio en el baño de agua en ángulo y acérquese gradualmente a los bordes de la sección de parafina para permitir la fijación parcial al portaobjetos.
- Mueva el portaobjetos dentro y fuera del baño para eliminar las posibles bolsas de aire debajo de la sección de tejido y para facilitar una mejor fijación. Secar los portaobjetos a 37 ºC durante 1 hora y guardarlos a temperatura ambiente para la tinción histológica.
- Coloque la corredera en un tanque. Desparafinar el portaobjetos con xileno durante 30 min y rehidratarlo en alcohol diluido secuencialmente (95%, 75% y 50% durante 3 min cada uno) y finalmente en agua destilada. Use una solución adecuada de rojo picrosirius para cubrir completamente las secciones de tejido durante 1 hora. Enjuague los portaobjetos en una solución de ácido acético al 0,5% durante dos cambios y luego realice dos enjuagues con alcohol absoluto.
- Seque el portaobjetos al aire y móntelo en resina sintética con un cubreobjetos. Fotografíe la diapositiva en un campo de luz visible.
nota: El área roja de la fotografía muestra una zona roja positiva de picrosirius bajo un microscopio con un aumento de 200X. Calcule el porcentaje de la zona roja positiva de picrosirius sobre el área total, que indica la extensión de la fibrosis.
