Tinción de Maule para lignina: una técnica para caracterizar la distribución de lignina en secciones de tallo de Arabidopsis thaliana

En este artículo

Resumen

Fuente: Pradhan Mitra, P. et al., Tinción histoquímica de los elementos secundarios de la pared celular de Arabidopsis thaliana. J. Vis. Exp. (2014).

En este video, describimos la técnica de tinción de Maule para teñir la sirigina lignina presente en las células vegetales especializadas. Esta técnica de tinción ayuda a caracterizar la distribución de lignina en el xilema y las fibras interfasciculares.

Protocolo

1. Tinción de Mäule

Disuelva 0,2 g de permanganato de potasio en 40 ml de agua destilada para preparar una solución de permanganato de potasio al 0,5%. Almacenar en un frasco oscuro a temperatura ambiente durante un máximo de 7 días.
1. Prepare una solución de HCl al 3,7% añadiendo 1 ml de HCl concentrado (37 N) a 9 ml de agua destilada (1:10). Prepare una solución fresca de HCl al 3,7% el día del experimento. Asegúrese de que la solución madre de HCl 37 N que se está utilizando no sea demasiado vieja. La solución concentrada de hidróxido de amonio (14,8 M) debe almacenarse a 4 °C para evitar que disminuya la molaridad de la solución saturada.
Transfiera las secciones del tallo a un tubo de microcentrífuga de 2,0 ml. Añadir 1 ml de la solución de permanganato potásico al 0,5% en el tubo que contiene las secciones.
1. Pipetear suavemente la solución de permanganato de potasio al 0,5%, preferiblemente sin alterar las secciones. Incubar durante 2 min y repetir el pipeteo. Deje reposar el tubo de microcentrífuga hasta que todas las secciones se asienten.
  nota: Tenga cuidado de no pipetear las secciones en la punta de la pipeta, ya que las secciones pueden dañarse. Puede ser difícil ver las secciones del tallo ya que la solución es oscura, así que mantenga el tubo con las secciones en la rejilla del tubo de ensayo y deje que se asienten durante 2 minutos.
2. Con una pipeta de 1 ml, extraiga 700 μl de solución de permanganato potásico al 0,5%. Agregue 700 μl de agua destilada para enjuagar la solución de permanganato de potasio. Repita 3-4 veces o hasta que la solución de agua permanezca clara.
3. Deseche el agua. Agregue rápidamente 1 ml de HCl al 3% hasta que el color marrón oscuro se elimine de las secciones. Esto puede suceder dentro de 3-5 minutos o puede requerir 2 lavados de 5 minutos cada uno. Pipetear toda la solución de HCl al 3% y continuar inmediatamente con el siguiente paso.
4. Añadir 1 ml de solución concentrada de hidróxido de amonio. Utilice una pipeta de 1 ml con la punta cortada de tal manera que las secciones se puedan pipetear fácilmente sin dañarse. Pipetee suavemente las secciones en la punta y en un portaobjetos de microscopio. Cubre las secciones con un cubreobjetos. Observe las secciones bajo iluminación de campo brillante. (Figura 1)
  cautela: Debido a que el hidróxido de amonio es extremadamente corrosivo, requiere cuidado y atención adicionales para evitar causar corrosión en la etapa del microscopio o la lente><. nota: Los vapores de hidróxido de amonio pueden empañar el cubreobjetos, lo que dificulta la observación de la muestra. Por lo tanto, tenga mucho cuidado antes de agregar el cubreobjetos. La solución se seca en 5-10 minutos, por lo que las imágenes deben completarse dentro de ese período de tiempo.

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Resultados

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Figura 1. Tinción de Mäule de secciones transversales de tallo de A. thaliana. Tinción de Mäule (color rojo) de una sección de tallo de A. thaliana de tipo silvestre que muestra la deposición normal de lignina en las paredes de las fibras interfasciculares y las células del xilema (A-E). Se indican las posiciones de la epidermis y la corteza (Ep), las fibras interfasciculares (Fi), la médula (Pi) y el xilema (Xy). Aumentos: Panel A:...