Tinción de rojo Congo: una técnica para visualizar depósitos de celulosa en secciones de tallo de plantas

Resumen

Fuente: Pradhan Mitra, P., Loqué, D. Tinción histoquímica de elementos secundarios de la pared celular de Arabidopsis thaliana. J. Vis. Exp. (2014).

En este video, demostramos el método de tinción de rojo Congo para visualizar los depósitos de celulosa en las secciones del tallo de Arabidopsis thaliana.

Protocolo

1. Tinción roja del Congo

1. Disolver 0,5 g de rojo congo en 100 ml de agua destilada para preparar una solución de rojo congo al 0,5%.
2. Transfiera las secciones del tallo a un tubo de microcentrífuga de 2,0 ml. Añadir 1 ml de la solución de rojo congo al 0,5% en el tubo. Pipetear suavemente la solución de rojo congo al 0,5% hacia arriba y hacia abajo sin alterar las secciones.
   NOTA: Tenga cuidado de no pipetear las secciones en la punta de la pipeta, ya que esto puede dañar las secciones.
3. Incubar a temperatura ambiente durante 10 min y repetir el pipeteo. Siga con otros 3 minutos de incubación a temperatura ambiente.
4. Utilice una pipeta de 1 ml para extraer 700 μl de solución de rojo de congo al 0,5%. Agregue 700 μl de agua destilada para enjuagar la solución de rojo congo. Repita el lavado 3-4 veces hasta que la solución de lavado esté clara.
5. Utilice una pipeta de 1 ml con la punta cortada de tal manera que las secciones se puedan pipetear fácilmente sin dañarse. Pipetee suavemente las secciones en la punta y en un portaobjetos de microscopio y cúbralas con cubreobjetos. Observe las muestras en el portaobjetos del microscopio bajo excitación de luz azul utilizando un filtro con un paso de banda de 560/40.
   NOTA: No almacene las secciones en agua durante mucho tiempo antes del análisis microscópico, ya que el agua lavará el rojo congo en 10-30 minutos.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Rojo Congo	sigma	C6277	3,3'-[[1,1'-bifenil]-4,4'-diylbis(azo)]bis(4-aminonaftaleno 1-sulfonato) [Número CAS 573-58-0]
Tubos de microcentrífuga (0,6 ml)	Axygen Científico	MCT-060-C
Cámara con chip CCD sin obturador mecánico	Hamamatsu	C4742-95
Cámara a color de alta velocidad	QImaging	MicroPublisher 5.0 RTV
Software de la cámara	Dispositivos moleculares	MetaMorph versión 7.7.0.0
Imaginando el análisis	adobe	Photoshop CS4
Micro Cubreobjetos, Cuadrado, Nº 1	VWR	48366-067	22 x 22 mm (7/8 x 7/8")-Los cubreobjetos son resistentes a la corrosión y uniformemente gruesos y planos. El espesor n.º 1 es de 0,13 a 0,17 mm.
Micro portaobjetos esmerilados, 1 mm	VWR	48312-003	75 x 25 mm - 1 mm
Cubo de filtro TX2	Leica	11513851/11513885	Filtro utilizado para el análisis del rojo Congo con un paso de banda de 560/40.