Tinción con blanco de calcoflúor: un método simple para la visualización de fluorescencia inducida por UV de depósitos de celulosa en las paredes celulares de secciones de tallo de plantas dicotiledóneas

Resumen

Fuente: Pradhan M. et al. Tinción histoquímica de elementos secundarios de la pared celular de Arabidopsis thaliana. J. Vis. Exp. (2014)

En este video, describimos un procedimiento de tinción para visualizar la deposición de celulosa dentro de las paredes celulares de Arabidopsis thaliana, una planta dicotiledónea, utilizando blanco de calcofluor, que se une específicamente a los glucanos ligados a β, exhibiendo fluorescencia bajo luz UV.

Protocolo

1. Incrustación de tallo

1. Preparar una solución de agarosa al 7% en agua (7 g de agarosa apta para electroforesis en 100 ml de agua destilada). Disuelva la agarosa esterilizándola en autoclave durante 20 minutos o calentándola en el microondas durante 20 minutos a la intensidad más baja (por ejemplo, 10% de intensidad de un microondas de 1,250 vatios).
2. Prepara un molde casero para incrustar los tallos con viales de plástico.
   1. Con una cuchilla de afeitar, corte la parte inferior cónica de un tubo de microcentrífuga con tapón de rosca de 2 ml (Parte A). Con una aguja de jeringa, perfore un agujero en la tapa del ....

Resultados

Figura 1. Molde casero para incrustar los tallos. En el lado izquierdo; la parte superior del tubo de microcentrífuga con tapón de rosca de 2 ml (parte A) y la parte inferior del tubo de microcentrífuga de 0,6 ml (parte B). En el lado derecho; el Parafilm que sostiene las dos partes; A y B para formar el molde final.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
agarosa	EMD	MERC2125	Número CAS: 9012-36-6
Abrillantador Fluorescente 28/ Calcofluor Tinte Blanco	sigma	F3543	Ácido 4,4'-bis[[4-[bis(2-hidroxietil)amino]-6-anilino-1,3,5-triazina-2-il]amino]estilbeno-2,2'-disulfónico [Número CAS 4404-43-7]
Vibratomo	Leica	Leica Microtomo de cuchilla vibratoria VT1000S	http://www.leicabiosystems.com/products/sectioning/vibrating-blade-microtomes/details/product/leica-vt1000-s/
navaja	Empresa americana de maquinillas de afeitar de seguridad	Articulo # 60-0139-0000	Hoja de doble filo de acero inoxidable (Personna Super)
Tubos de microcentrífuga con tapón de rosca (2 ml)	VWR	16466-044
Tubos de microcentrífuga (0,6 ml)	Axygen Científico	MCT-060-C
Mitt	Bel-Arte	380000000	SCIENCEWARE Guante protector de manos calientes
Adhesivo para tejidos	Ted Pella Inc	10033	Almacenar a 4 °C o 20 °C durante 3 meses o más
microonda	Panasonic	NN-SD762S	PELCO Pro CA 44 Adhesivo instantáneo para tejidos
Micro Cubreobjetos, Cuadrado, Nº 1	VWR	48366-067	22 x 22 mm (7/8 x 7/8")-Los cubreobjetos son resistentes a la corrosión y uniformemente gruesos y planos. El espesor n.º 1 es de 0,13 a 0,17 mm.
Micro portaobjetos esmerilados, 1 mm	VWR	48312-003	75 x 25 mm - 1 mm
Parafilm M	Embalaje de Alcan	BRNDPM998