Electroforesis capilar microfluídica para el dimensionamiento de fragmentos de productos de PCR: una técnica de separación electroforética basada en microchips para separar fragmentos de ADN en función del tamaño

Resumen

Fuente: Wang, H., Zhu et al. Un ensayo robusto basado en la reacción en cadena de la polimerasa para cuantificar las repeticiones de trinucleótidos de citosina-guanina-guanina en el gen del retraso mental del cromosoma X frágil-1. J. Vis. Exp. (2019).

Este video describe la técnica de electroforesis capilar microfluídica para separar amplicones de PCR en función de su tamaño. Esta técnica ayuda en el dimensionamiento de fragmentos utilizando tintes fluorescentes y marcadores de tamaño molecular estándar.

Protocolo

1. Dimensionamiento de fragmentos de productos PCR

1. Antes de comenzar, deje que el concentrado de tinte de ADN, la matriz de gel de ADN, el marcador de ADN, la escalera de ADN y las muestras de ADN purificadas se equilibren a temperatura ambiente durante 30 minutos.
2. Configurar la estación de cebado
   1. Reemplace la jeringa (consulte la Tabla de materiales) cuando utilice un nuevo lote de reactivos.
   2. Ajuste la placa base, suelte la palanca del clip de la jeringa y deslícela hasta la posición superior.
3. Inicie el software de dimensionamiento (consulte la

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Instrumento Agilent 2100 Bioanalyzer: tubos de PCR de 0,2 ml	Axygen	PCR-02D-C
Instrumento Agilent 2100 Bioanalyzer: 1x tampón TE, pH 8,0, sin arnana	Ambiente	AM9849
Instrumento Agilent 2100 Bioanalyzer: Instrumento Bioanalyzer 2100	Agilent	G2939AA
Instrumento Agilent 2100 Bioanalyzer: placa de PCR de 96 pocillos	Termo Fisher	AB0800
Instrumento Agilent 2100 Bioanalyzer: Cartucho de electrodos	Agilent		Suministra el equipo del instrumento Bioanalyzer 2100
Instrumento Agilent 2100 Bioanalyzer: Mezclador de vórtice IKA	Agilent		Suministra el equipo del instrumento Bioanalyzer 2100
Instrumento Agilent 2100 Bioanalyzer: Software de dimensionamiento 2100 Software experto	Agilent		Suministra el equipo del instrumento Bioanalyzer 2100
Instrumento Agilent 2100 Bioanalyzer: Chips de prueba	Agilent		Suministra el equipo del instrumento Bioanalyzer 2100
Kit Agilent DNA 7500	Agilent	5067-1506	Para el tamaño de fragmentos
Kit Agilent DNA 7500: DNA 7500 Ladder (tapa amarilla)	Agilent		En kit: Kit Agilent DNA 7500 (número de catálogo: 5067-1506)
Kit Agilent DNA 7500: Marcadores DNA 7500 (tapa verde)	Agilent		En kit: Kit Agilent DNA 7500 (número de catálogo: 5067-1506)
Kit Agilent DNA 7500: chips de ADN	Agilent		En kit: Kit Agilent DNA 7500 (número de catálogo: 5067-1506)
Kit Agilent DNA 7500: Concentrado de colorante de ADN (tapa azul)	Agilent		En kit: Kit Agilent DNA 7500 (número de catálogo: 5067-1506)
Kit Agilent DNA 7500: Vial de matriz de gel de ADN (tapa roja)	Agilent		En kit: Kit Agilent DNA 7500 (número de catálogo: 5067-1506)
Kit Agilent DNA 7500: Limpiador de electrodos	Agilent		En kit: Kit Agilent DNA 7500 (número de catálogo: 5067-1506)
Kit Agilent DNA 7500: Filtro de centrifugado	Agilent		Suministros del kit Agilent DNA 7500 (número de catálogo: 5067-1506)
Kit Agilent DNA 7500: Jeringa	Agilent		Suministros del kit Agilent DNA 7500 (número de catálogo: 5067-1506)
Estación de cebado de virutas	Agilent	5065-4401	Suministra el equipo del instrumento Bioanalyzer 2100
Colector de vacío de placa de filtro: Colector de vacío MultiScreenHTS	Merck Millipore	MSVMHTS00	Instrumento de vacío para colector de vacío de placa de filtro para la purificación de productos PCR
Colector de vacío de placa de filtro: Tapón de silicona	Merck Millipore	XX2004718	Colector de vacío de placa filtrante
Colector de vacío de placa de filtro: Bomba de vacío	Merck Millipore	WP6122050	Colector de vacío de placa filtrante
Colector de vacío de placa filtrante: Recipiente de recogida de residuos	Merck Millipore	XX1004705	Colector de vacío de placa filtrante