Electroforesis en gel de zimografía: una técnica electroforética para detectar metaloproteinasas de matriz mediante la evaluación de la actividad enzimática

Resumen

Fuente: Hu, X. et al., Detección de metaloproteinasas de matriz funcional por zimografía. J. Vis. Exp. (2010)

Este video muestra la técnica de electroforesis en gel de zimografía para evaluar la actividad de las metaloproteinasas de la matriz (MMPs) presentes en el sobrenadante de cultivo celular. Las MMP activas degradan el sustrato específico de MMP incrustado en un gel de poliacrilamida, que aparece como bandas transparentes sobre un fondo teñido oscuro después de la tinción.

Protocolo

1. Carga y funcionamiento del gel

1. Todas las muestras deben prepararse adecuadamente para mantener la función de las enzimas y utilizarse inmediatamente después de la recogida o almacenarse congeladas a -80 °C. Las muestras no deben contener agentes reductores (como el β-mercaptoetanol) ni hervirse antes de la carga del gel.
2. Abra la bolsa que contiene un gel dentro de un casete, enjuague el casete con agua desionizada.
   1. Retire la cinta protectora de la parte inferior del casete y el peine de la parte superior del gel.
   2. Enjuague los pocillos tres veces con tampón corriente (diluido a 1X en agua desionizada).

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Aparato de electroforesis Xcell SureLock Mini-Cell con marcado CE	Invitrogen	EI0001
Fuente de alimentación (modelo 302)	VWR	93000-744
Novex 10% gelatina zymogram gels, 1,0 mm, 12 pocillos	Invitrogen	EC61752BOX
Tampón de carga de gel Blue Juice	Invitrogen	10816015
Consejos de carga de gel	VWR	53509-015
Estándar de peso molecular de proteínas	Invitrogen	LC5800
Tampón de ejecución Novex Tris-Glycine-SDS	Invitrogen	LC2675
Tampón de renaturalización Novex zymogram	Invitrogen	LC2670
Tampón de desarrollo de zimograma Novex	Invitrogen	LC2671
SimplyBlue SafeStain	Invitrogen	LC6060