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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE
1. Evaluación del flujo sanguíneo cerebral con espectroscopia de correlación difusa
- Adquisición de datos DCS
- Retira el vello del cuero cabelludo. Debido a que la EDC funciona mejor en ausencia de pelo, es necesario eliminar el pelo de la cabeza antes del inicio de los experimentos. Por lo general, la depilación se realiza de 1 a 3 días antes del inicio del estudio.
- Inducir ratones con isoflurano al 4,5% en oxígeno al 100% durante 45 segundos y mantener con isoflurano al 1-2% en oxígeno al 100%.
- Afeita la cabeza entre los ojos y las orejas. Luego, use crema depilatoria para eliminar el pelo de la cabeza como se muestra en la Figura 1.
- Permita que el animal se recupere de la anestesia en una almohadilla térmica y luego regrese a la jaula.
- Mida el flujo sanguíneo cerebral con EDC. Para minimizar los artefactos de movimiento durante la medición, estudie ratones bajo anestesia breve con isoflurano.
nota: Controle visualmente la respiración y la respuesta al pellizco de los dedos de los pies durante las mediciones y ajuste la concentración de isoflurano según sea necesario para garantizar una profundidad constante de la anestesia. Variaciones significativas en la profundidad de la anestesia podrían alterar el flujo sanguíneo dados los conocidos efectos vasomoduladores del isoflurano.
- Inducir con isoflurano al 4,5% en oxígeno al 100% durante 45 segundos y luego mantener con isoflurano al 1,0-1,75% en oxígeno al 100%. Confirme la profundidad suficiente de la anestesia por la ausencia de una respuesta de pinzamiento de los dedos del pie y una respiración normal (entre ~ 60-80 respiraciones por minuto).
- Después de un período de estabilización de 2 minutos, apoye suavemente el sensor DCS sobre el hemisferio derecho de modo que el borde superior del sensor óptico se alinee con la parte posterior del ojo y el lado del sensor se alinee a lo largo de la línea media (Figura 1). Coloque una mano sobre el sensor para protegerlo de la luz de la habitación. Adquiere 5 segundos de datos (adquisición de 1 Hz).
- Vuelva a colocar el sensor sobre el hemisferio izquierdo y adquiera 5 segundos de datos.
- Repita 3 veces/hemisferio para tener en cuenta las heterogeneidades locales debajo de la superficie del tejido.
- recuperación
- Retire el ratón de la anestesia y colóquelo sobre una almohadilla térmica.
- Después de que el ratón recupere su reflejo de enderezamiento, devuélvalo a la jaula.
