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Artículo de método

Construcción de un modelo de ratón humanizado con inmunidad modificada contra el VIH

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8 de julio de 2025

En este artículo

Resumen

Fuente: Zhen, A., et al. Inmunidad modificada basada en células madre contra la infección por VIH en el modelo de ratón humanizado. J. Vis. Exp. (2016).

El video muestra una técnica para generar un modelo de ratón humanizado con inmunidad de ingeniería basada en células madre contra el virus de inmunodeficiencia humana (VIH). El tejido del timo fetal humano y las células madre hematopoyéticas (HSC) modificadas genéticamente se implantan en la cápsula renal de un ratón gravemente inmunodeprimido. Las HSC, que expresan receptores de antígenos quiméricos (CAR) contra el VIH, se mezclan en una mezcla de proteínas gelatinosas que promueve su colocalización con el tejido del timo. Después del procedimiento, las HSC se diferencian en varias células inmunitarias humanas, lo que da como resultado el desarrollo de un modelo de ratón humanizado con un sistema inmunitario humano funcional contra el VIH.

Protocolo

Todos los procedimientos relacionados con la recolección de muestras se han realizado de acuerdo con las directrices del IRB del instituto. Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado animal y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

>1. Construcción de ratones humanizados modificados con receptor de antígeno quimérico CD4

  1. Procesamiento del timo fetal y aislamiento de HSC CD34+ del hígado fetal
    1. Procesamiento del timo
      1. Lavar suavemente el timo en solución salina....

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Divulgaciones

No se han declarado conflictos de interés.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Kit de microperlas CD34miltenyi130-046-702Para la clasificación de células progenitoras CD34+ humanas
BambankerWako302-14681para congelar células
Kit de ARN viral QIAampQiagen52904Para medir la carga viral en el suero
MACSQutómetro de flujoMiltenyiPara el análisis de caudal
BD LSRFortessa™BD biocienciasPara el análisis de caudal
hialuronidasasigmaH6254-500MGPara la digestión de tejidos
Desoxirribonucleasa IWorthingtonLS002006para la digestión de tejidos
colagenasaTecnología de vida17104-019para la digestión de tejidos
Sistema de detección PCR en tiempo real CFXBioradPara medir la carga viral y la expresión génica
Ratones, cepa NOD. Cg-Prkdcscid il2rgtm1Wjl/SzJEl Laboratorio Jackson5557Para la construcción de los ratones humanizados
Penicilina Estreptomicina (estreptococo en pluma)Thermo Fisher Scientific10378016Para el cultivo de células
piperacilina/tazobactamPfizerZosynAntifúngico
Anfotericina B (Fungizone antimicótico)Thermo Fisher Scientific15290-018Antifúngico
AUTOCLIP Pinzas para heridas, 9 mm - 1000 unidadesBecton Dickinson427631Para la cirugía
Batas quirúrgicas estériles Aurora reforzadas con polietileno, 30 por cajaMedlineDYNJP2707Para la cirugía
Suturas, 4-0, vicrylOwens y Minor23000J304HPara la cirugía
Almohadillas de preparación para bebidas alcohólicasOwens y Minor3583006818Para la cirugía
Guantes, quirúrgicos, 6 1/2Owens y Minor4075711102Para la cirugía
Medio de células T sin suero de YsselBioproductos Gemini400-102Para la transducción de células CD34+
Albúmina sérica humanaSigma-AldrichA9511Para la transducción de células CD34+

Etiquetas

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