Técnicas y métodos de investigación de organoides de próstata: cultivo tridimensional (3D), centrifugación, Parafilm con hoyuelos y método de fusión

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Sanghee Lee

University of California San Diego

La Dra. Sanghee Lee obtuvo su doctorado en el Departamento de Urología y el Programa de Biología Celular y Molecular de la Universidad de Wisconsin-Madison en 2015. Su director de tesis fue el Dr. Wade Bushman, y describió la comunicación cruzada neural entre la vejiga y la próstata, así como los cambios funcionales inducidos por la inflamación prostática en la vejiga urinaria de ratones adultos. Como becaria posdoctoral, la Dra. Lee estudió la disfunción de la vejiga neurogénica en un modelo murino de esclerosis múltiple en el laboratorio de la Dra. Anna Malykhina en el Campus Médico Anschutz de la Universidad de Colorado. En 2017, la Dra. Lee se incorporó a la Universidad de California en San Diego (UCSD) como la primera becaria en Neuro-Urología con nombramiento conjunto en el Departamento de Urología de UCSD y en el Hospital Pediátrico Rady de San Diego. Los miembros de su comité asesor de investigación son la Dra. Christina Jamieson (PI), el Dr. George Chiang, el Dr. Yahir Santiago-Lastra, el Dr. Todd Coleman y el Dr. Tony Yaksh. Sus actuales intereses de investigación incluyen los mecanismos de metástasis y dolor en el cáncer de próstata con metástasis ósea.

Christina Jamieson

University of California San Diego

La Dra. Jamieson es científica traslacional en Oncología Urológica, en el Departamento de Urología de la Universidad de California en San Diego (UCSD). Investiga las causas de la metástasis ósea y ha establecido nuevos modelos derivados de muestras de pacientes para probar terapias novedosas y ofrecer esperanza a pacientes con cáncer de próstata avanzado y resistente a la castración. Obtuvo su doctorado en Inmunología Molecular en la Universidad de Brandeis con el Dr. Ranjan Sen, y demostró que la estimulación del receptor de células T (TCR) inducía por sí sola la activación de NF-kB y NF-AT. La Dra. Jamieson se trasladó a la Universidad de California en San Francisco (UCSF) para su formación posdoctoral, primero con el Dr. Dan R. Littman y luego con el Dr. Keith R. Yamamoto. Descubrió mecanismos de interacción de señales entre TCR y glucocorticoides que regulan la supervivencia de los progenitores de células T, moldeando así el repertorio inmunitario. Estas vías también pueden estar desreguladas en cánceres impulsados por hormonas esteroides. La Dra. Jamieson comenzó como profesora asistente en los departamentos de Urología y Genética Humana de la UCLA para investigar los mecanismos de resistencia a la terapia basada en hormonas esteroides en el cáncer, y luego se trasladó a la UCSD para centrarse en cómo superar la resistencia a la terapia en el cáncer de próstata metastásico óseo, utilizando modelos basados en muestras de pacientes y nuevas terapias.

Collection Overview

Los organoides son estructuras celulares tridimensionales (3D) cultivadas ex vivo que se cree que recapitulan y mantienen las condiciones in vivo de viabilidad celular y respuesta a fármacos terapéuticos. Se ha utilizado Matrigel o colágeno como matriz extracelular para permitir que las células derivadas de pacientes formen estructuras tridimensionales u organoides, incluyendo estructuras tipo quiste y esferoides. Se considera que los organoides cultivados en 3D son excelentes modelos para comprender los mecanismos de tumorigénesis y determinar los efectos de agentes anticancerígenos. Por lo tanto, se han desarrollado métodos para una variedad de cánceres, como los del cerebro, mama, pulmón y próstata, entre otros. La próstata, sin embargo, es algo particular en el sentido de que los métodos actuales para el cultivo de organoides presentan una tasa de éxito menor que en otros tipos de cáncer. La dificultad para establecer cultivos de organoides prostáticos puede deberse en parte a la heterogeneidad tumorigénica. La mayoría de los organoides prostáticos se derivan de xenoinjertos derivados de pacientes (PDX) y son representativos, a nivel genómico, del cáncer de próstata del paciente. Por consiguiente, los modelos de organoides PDX son invaluables para estudiar la señalización descendente de moléculas diana y los efectos del tratamiento con agentes anticancerígenos. Varios grupos han desarrollado protocolos modificados optimizados según sus objetivos experimentales. El objetivo de esta colección es: (1) proporcionar varios ejemplos de condiciones de cultivo optimizadas para organoides 3D de cáncer de próstata derivados de pacientes, (2) presentar metodologías complementarias para técnicas a nivel de célula individual, como hibridación in situ de ARN (RNA-FISH) y citometría de flujo, (3) compartir detalles minuciosos de la técnica de inmunohistoquímica (IHC) e inmunofluorescencia (IF) específica para organoides, y (4) criterios diferenciales para determinar los efectos del tratamiento farmacológico en los organoides.