Purificación de un extracto lípido Total con cromatografía de columna

1. configuración y preparación de materiales

1. Obtener un total de lípidos extracto (TLE) utilizando un método de extracción por solvente (sonicación, Soxhlet o extracción acelerada de disolvente (ASE)).
2. Se reúnen las siguientes: combustión de borosilicato de vidrio pipetas y bulbos, gel de sílice, hexano, diclorometano (DCM) y el metanol.
   1. Estos materiales pueden adquirirse en cualquier tienda química. Los reactivos deben ser puro y libre de hidrocarburos.
3. También obtener combustión lana de vidrio y frascos de vidrio de borosilicato de 4 mL.
4. Asegúrese de tener un medio de apoyo a la columna y los frascos de colección durante el procedimiento. Por ejemplo, un soporte con pinzas y un rack de vil. Muchos laboratorios han diseñado a medida estantes que contienen varias columnas y frascos de colección (figura 2). Esto permite que muchas columnas para ejecutarse al mismo tiempo.

2. métodos

1. Comenzar con la muestra seca en un vial de 4 mL. Si la muestra se pesa más de ~ 10 mg cuando seco, necesite dividirse antes de realizar los pasos como el gel de silicona sólo pueden reaccionar con una masa finita de materia orgánica.
2. Suspender la muestra en una pequeña cantidad de hexano. Este es el primero y el menos polar de los tres solventes utilizados en este experimento.
3. Si hay pegada en el interior del frasco de la muestra, someter a ultrasonidos las muestras durante 5 minutos.
4. Coloque una pequeña cantidad de lana de vidrio en la parte superior de una pipeta mediante un conjunto de pinzas limpias. Empuje suavemente la lana de vidrio en la parte inferior de la pipeta, con otra pipeta, para formar un tapón.
5. Cuidadosamente transfiera gel de sílice en la pipeta hasta que esté aproximadamente medio llena.
6. Colocar un frasco de 4 mL de recolección debajo de la columna.
7. Remojo el gel de sílice en la pipeta y 3 volúmenes de hexano. Esto condiciona la columna, elimina las burbujas de aire y enjuaga las impurezas de la gel de sílice.
8. Una vez hecho el lavado final, sacar la cubeta de recogida de residuos y reemplácelo con un frasco para recoger la fracción apolar.
9. Cuidadosamente transfiera toda la muestra en hexano a la columna mediante una pipeta. Enjuagar el frasco de la muestra dos veces con pequeños volúmenes de hexano y transferir a la columna. Permita que el hexano de que la muestra fue transferida en que absorba totalmente el gel de sílice. En ningún momento durante el procedimiento si el gel de sílice seca.
10. Continuar agregando hexano en la parte superior de la muestra hasta que el frasco debajo de la columna es casi completo (~ 4 mL).
    1. Permitir a todos el hexano para entrar en el gel de silicona antes de comenzar con el siguiente solvente.
11. Coloque el frasco debajo de la columna media polaridad.
12. Añadir DCM a la parte superior de la columna hasta que el frasco está casi lleno. Una vez más, permite todos lo DCM para entrar en el frasco antes de comenzar el siguiente solvente.
13. Coloque el frasco debajo de la columna polar.
14. Agregar metanol a la parte superior de la columna hasta que la colección vil está casi llena.