Identificación de roedores II

La capacidad de identificar animales de investigación individuales es un aspecto esencial del mantenimiento de registros científicos y la recopilación de datos. La distinción entre animales garantiza que se utilice el sujeto correcto para el procedimiento experimental previsto.

Hay varios métodos permanentes y temporales que los científicos utilizan para identificar animales de laboratorio individuales. En este video, discutiremos los métodos que involucran tatuar la cola de un roedor adulto, dedos recién nacidos y dedos adultos. A continuación, hablaremos de la técnica de colocación de microchips que se realiza comúnmente en ratas adultas, seguida del método de identificación temporal universal que utiliza tintes no tóxicos.

Antes de profundizar en los protocolos para estos métodos, repasemos las consideraciones, beneficios y deficiencias de cada una de estas técnicas. El tatuaje de la cola es beneficioso en muchos protocolos de investigación, como los experimentos que involucran imágenes de resonancia magnética o aquellos en los que los animales están genéticamente predispuestos a afecciones de la piel, incluida la dermatitis ulcerosa. Otra ventaja de los tatuajes de cola es que se visualizan fácilmente sin tener que sujetar manualmente al animal.

Ciertos protocolos experimentales requieren el genotipado de los neonatos desde el primer día, lo que hace esencial que estas crías sean identificadas de forma permanente. El uso de tatuajes en los dedos de los pies permite identificar a estos animales hasta que sean lo suficientemente grandes como para marcarlos o golpearlos en las orejas. Es una buena idea aplicar un tatuaje similar en el dedo del pie de la madre adulta para evitar que reaccione de forma exagerada y acicale excesivamente el nuevo tatuaje de su cachorro. Aunque el uso de este método tiene varias ventajas, la desventaja es que el procedimiento requiere habilidad, práctica, mano firme y equipo especializado.

El siguiente método de identificación permanente que se está considerando es el microchip. Aunque implantar microchips es un proceso relativamente sencillo, existen varios factores que limitan su utilidad. En primer lugar, estos chips son aproximadamente del tamaño de un grano grande de arroz y requieren una aguja de calibre 10-12 para su implantación, que es demasiado grande para un ratón, lo que limita el método a ratas adultas. En segundo lugar, los microchips son caros y, por lo tanto, no son ideales para identificar un gran número de animales. Por último, los microchips no se pueden utilizar en los experimentos que involucran resonancia magnética. Sin embargo, si hay un grupo de animales valiosos, como los animales reproductores, con una genética única que debe identificarse permanentemente, se pueden utilizar microchips.

El último método del que hablaremos es la identificación temporal mediante marcadores no tóxicos. Los marcadores no tóxicos están hechos para colorear el pelaje de los animales de investigación. Este método es ideal para estudios a corto plazo que requieren que los animales se identifiquen solo durante unas pocas horas o días, aunque los tintes pueden permanecer visibles durante varias semanas. Algunos investigadores utilizan estos marcadores junto con otros métodos de identificación para detectar fácilmente animales específicos en un grupo.

Ahora que hemos discutido los antecedentes, aprendamos los procedimientos, comenzando con el tatuaje de la cola. Aquí, demostraremos el procedimiento en ratones adultos, pero lo mismo se puede aplicar para ratas destetadas y adultas.

Para minimizar cualquier aprensión o angustia para los animales, el tatuaje de la cola debe realizarse en la sala de procedimientos en lugar de en el área de alojamiento de animales. Antes de aplicar el tatuaje, sujeta al ratón con un sujetador de copas, con la cola tensada desde la abertura. El brido de la copa se mantiene en su lugar a través de una plataforma de vidrio especializada. A continuación, limpie la cola con una pequeña cantidad de limpiador de pañuelos diluido en un bastoncillo con punta de algodón. Este paso es importante para eliminar cualquier acumulación de incrustaciones y residuos que puedan interferir con el tatuaje. A continuación, aplique aceite de papel en la piel de la cola con otro hisopo. Esto minimiza el daño a los tejidos al suavizar la piel y proporcionar lubricación para la aguja del tatuaje. Además, el aceite disuelve la suciedad no eliminada por el proceso de limpieza y evita las manchas de tinta en la piel no tatuada. Ahora estás listo para aplicar el tatuaje.

Mientras la máquina está apagada, sumerge la punta de la aguja del tatuaje, que puede ser una lanceta o una aguja hipodérmica, en el pigmento. A continuación, active la pistola con el pedal, coloque la herramienta de tatuaje en la cola y lleve la punta de la aguja al sitio del tatuaje. ¿Acercarse a la piel con la aguja a 90? se inclinan y penetran lo suficientemente profundo en la dermis de modo que el pigmento se deposita permanentemente. Un cambio en el sonido de la aguja activada puede ayudar a discernir la profundidad. Haz trazos cortos y uniformes en una dirección, formando números y letras. Trata de usar curvas y ángulos mínimos al aplicar el tatuaje.

Para agregar pigmento adicional, sumerja la punta de la aguja en el depósito de tinte por cada uno o dos caracteres para ratones y cada carácter para ratas. Seca el tatuaje completo con una toalla de papel para eliminar el exceso de pigmento. La presencia de sangre en el tatuaje o en la toalla de papel indica que el tatuaje se hizo demasiado profundo y, por lo tanto, es poco probable que sea permanente. Refuerce los caracteres finos con pigmento adicional colocando la aguja paralela al pigmento ya depositado, no encima de él. Limpie a fondo el equipo de tatuaje después de cada uso, y se debe usar una aguja nueva o esterilizada y un suministro nuevo de tinta entre jaulas para evitar la transmisión de enfermedades.

A continuación, aprenderemos cómo aplicar tatuajes en los dedos de los pies a neonatos y adultos. Aquí, demostraremos el procedimiento en ratones, pero los mismos pasos son aplicables para ratas.

Los neonatos están tatuados en los dedos de los pies, ya que los huesos de la cola no están osificados y la longitud de la cola es demasiado pequeña. Además, a medida que la cola crece, la piel se estira y los números pueden distorsionarse, volverse débiles e ilegibles. Empieza colocando una mancha de pasta verde para tatuajes sobre una superficie no porosa, como el papel de aluminio. A continuación, coloque al cachorro predestetado en su mano con una gasa. Coloque el pie entre el pulgar y el pliegue del dedo índice para exponer los dedos elegidos para tatuar. Sostenga el pie cerca de los dedos para que el dedo seleccionado tenga una superficie sólida detrás de él para evitar que se doble.

Ahora, sumerge la punta de una lanceta de 4,5 mm en la pasta para tatuajes. Luego, empuje el dedo del pie deseado según el código predeterminado. Para asegurar una permeabilidad adecuada, pinche el mismo lugar tres veces. Penetra en la piel lo suficiente como para que la pasta deje una marca, pero evita pinchar tan profundamente que el dedo del pie sangre. Seca suavemente el nuevo tatuaje con la gasa para eliminar el exceso de pasta de tatuaje y devuelve al animal a su jaula. Use una lanceta nueva para la próxima camada. Un día después del procedimiento, verifica que el tatuaje sea visible.

Cuando se tatúan cachorros lactantes, es aconsejable tatuar también a la madre. Esto puede evitar que reaccione de forma exagerada y acicale excesivamente los tatuajes de su cachorro. Para aplicar un tatuaje en el dedo del pie a un adulto, de nuevo, primero coloca una pequeña mancha de pasta verde para tatuajes sobre un papel de aluminio. Luego, sujete al animal con un cono de plástico o un sujetador de plexiglás que permita el acceso a las patas traseras. Extienda el pie del dispositivo de sujeción y coloque el pie entre el pulgar y el pliegue del dedo índice para exponer los dedos elegidos para tatuar.

Ahora, sumerge la punta de una lanceta de 5 mm en la pasta para tatuajes. Y, como antes, aplicar el tatuaje pinchando y perforando la piel del dedo del pie deseado al menos tres veces para asegurar una correcta penetración. A continuación, seca suavemente el tatuaje para eliminar el exceso de pasta y devuelve al animal a su jaula. Al igual que con los neonatos, verifica el tatuaje un día después del procedimiento. Si la marca es visible al día siguiente del tatuaje, debe permanecer visible durante toda la vida del animal. Si es tenue o no es visible, rehaz el tatuaje como se describió anteriormente.

El siguiente método de identificación del que hablaremos consiste en implantar microchips en roedores. El chip comúnmente utilizado para etiquetar animales de laboratorio es un chip de identificación por radiofrecuencia, o RFID. Por lo general, el chip está precargado en agujas, que luego se pueden colocar en el aplicador. Para la inserción del chip, use un tubo de plexiglás para sujetar al animal, asegurándose de que aún pueda agarrar la piel por encima de los hombros. Primero, cubre la piel para crear un bolsillo. A continuación, coloque la aguja a través de la piel, biselada hacia arriba, paralela al lomo y dirigida hacia la cola. Expulse el microchip por vía subcutánea y retire la aguja. Apriete la piel para cerrarla en el lugar de la inyección para evitar que el chip siga a la aguja fuera de la piel. Continúe aplicando presión para proporcionar hemostasia para cualquier sangrado de la piel. Retire al animal del dispositivo de sujeción y escanee el chip con el lector proporcionado por el fabricante para confirmar el código de identificación.

Por último, aprendamos cómo aplicar tintes temporales a los roedores para su identificación. Empecemos por los ratones. Primero, sujete al animal de manera que el área entre los omóplatos sea accesible. Esta parte del cuerpo está a salvo del autoaseo. Coloca una mancha o raya del tinte en el pelaje en esta área y vuelve a colocar al animal en su jaula.

En el caso de las ratas, sujete al animal manualmente agarrando la cola y manteniéndola tensa. Esto asegura que el área para la aplicación del tinte sea fácilmente accesible, que podría ser la cabeza, los hombros o la grupa. Coloca una mancha o raya del tinte en el pelaje. A veces es posible aplicar un tinte no tóxico sin sujetar al animal. Revise las marcas de estos animales periódicamente, especialmente si los está utilizando como único identificador durante más de unos pocos días.

Ahora que hemos revisado los procedimientos de estos diferentes métodos de identificación, veamos cómo los científicos los están utilizando en diferentes estudios de investigación en la actualidad.

El uso de roedores en experimentos de comportamiento es bastante común. Aquí, los investigadores utilizaron el tatuaje de la cola para marcar a los animales de forma permanente y luego los observaron durante varios días en un entorno de jaula casera construido artificialmente. Los datos recopilados revelaron diferencias en los comportamientos, como la distancia de movimiento, entre los animales de control y los de experimentación, durante un período de 10 días después de la cirugía.

En otro experimento de comportamiento, los investigadores realizaron tatuajes de los dedos de los pies en neonatos y los colocaron en una caja de grabación con micrófonos especiales para grabar vocalizaciones ultrasónicas. El propósito de este experimento fue observar las diferencias en la tasa de llamadas, es decir, el número de vocalizaciones por minuto, en ratones de tipo salvaje y deficientes en Shank2 -un modelo de autismo- durante el período neonatal de 12 días y la edad adulta.

Por último, como se ha comentado anteriormente, el uso de tintes no tóxicos es una forma eficaz de marcar animales para experimentos a corto plazo. Aquí, los científicos estaban interesados en la expresión transitoria de una proteína plasmática. Por lo tanto, marcaron a los animales con marcadores temporales, inyectaron el ADN plasmídico por vía intravenosa y recolectaron la muestra de sangre dos días después para determinar la expresión de proteínas utilizando la técnica de Western blot.

Acabas de ver la introducción de JoVE al tatuaje, la colocación de microchips y los métodos de identificación temporal para ratones y ratas de laboratorio. La identificación de animales es un componente principal del mantenimiento de registros en la investigación. Por lo tanto, a la hora de elegir el método de identificación adecuado, hay que tener en cuenta muchos factores. Esto incluye el nivel de incomodidad para el animal, la facilidad de la técnica, las necesidades experimentales y, finalmente, el costo asociado con el método. Como siempre, ¡gracias por mirar!