Cromatografía de gases (CG) con detección de ionización de llama

1. inicialización de la GC

1. Encienda el gas portador de helio y aire y ajuste de los manómetros en el instrumento.
2. Encender el horno de la columna a una temperatura alta (típicamente 250 ° C o superior) para hornear en la columna. No exceda la temperatura máxima de la columna. Esto eliminará cualquier contaminante. Dejarlo cocer durante al menos 30 minutos antes de ejecutar una muestra.

2. haciendo un archivo de métodos

1. El software controla el instrumento, todos los valores deseados para un archivo de métodos de entrada. En primer lugar, establecer la configuración de muestreadores. Establecer el número de enjuagues pre ejecución, ejecutar los enjuagues y enjuagues con la muestra. Estos enjuagues limpiar la columna entre diferentes muestras.
2. La cantidad inyectada es típicamente 1 μl. Una relación de split se encuentra generalmente porque la inyección de una muestra puede sobrecargar la columna. Si la relación de split es 100: 1, esto significa que por cada 1 parte que se inyecta en el instrumento 100 partes va a perder.
3. De entrada los parámetros de la fase móvil. El caudal es controlado por el sistema de presión. Las tasas de flujo más rápidas llevan a separaciones más rápidos, pero hay menos tiempo para el analito a interactuar con la columna.
4. Entrar en la programación de la temperatura. Para un funcionamiento isotérmico, ingrese la temperatura de la separación y luego un tiempo para la separación. Una elución gradiente, introduce la temperatura inicial y tiempo, la temperatura final de espera y mantener el tiempo y la velocidad de rampa en ° C/min. Un tiempo de equilibrado se establece también que permite la columna espalda fría a la temperatura original entre carreras.
5. Introducir los parámetros del detector. Se introducirá una tasa de temperatura y muestreo del detector. El detector debe ser siempre una temperatura más alta que la temperatura de la columna por lo que no hay analito se condensa en el detector.
6. Guarde el archivo de métodos. Los parámetros también necesitará descargarse por lo que leen por el GC.

3. recogida de datos GC

1. Encienda el gas de hidrógeno y asegúrese de que ajustar correctamente el medidor de presión. Luz de la llama de la FID.
2. En el estante de muestreadores, llenar la cubeta de lavado con el solvente de lavado, como el acetonitrilo o metanol. Asegúrese de que el frasco de residuos es vacío.
3. Preparar la muestra. Si existe alguna posibilidad de partículas en la muestra, filtrar la muestra. Porque a veces se observan residuos plásticos con GC, uso único vidrio jeringas y frascos para preparar la muestra de vidrio.
4. Llene el frasco por lo menos la mitad con la muestra por lo que se asegura la jeringa del inyector automático para recoger la muestra. Automuestreador viales suelen ser 2 mL, pero si el volumen de muestra es limitada, insertos vial están disponibles para reducir el volumen de muestra necesario.
5. Cargar los frascos de muestra en el estante del muestreador automático. El seguimiento de qué posición en cada muestra.
6. Antes de la carrera, cero la base del registrador de carta en el software de computadora.
7. Los archivos pueden recogerse como una única prueba o usando una tabla de lote para múltiples pistas. Asegúrese de especificar el número correcto del frasco para la muestra. Pulsa el botón "Inicio" y hacer un archivo.
8. Datos normalmente son analizados con un programa de software. Parámetros que pueden medirse son tiempo de retención, altura, área de pico y número de platos teóricos.

4. resultados: Análisis de GC de muestras de café

1. En este ejemplo, se realizó análisis de GC-FID para cafeína y ácido palmítico, dos compuestos que se encuentran en el café. La cafeína es menos polar que el ácido palmítico, que tiene una cola de alcanos de cadena larga. Así, la cafeína se retiene menos y elutes primero en la columna no polar de 95% dimetilpolisiloxano y 5% fenil-arylene (figura 1).
2. Desde el cromatograma, se pueden calcular las áreas de pico. Las áreas de pico son proporcionales a la masa de carbono que pasa por el detector y pueden ser utilizados para hacer una curva de calibración de concentración del instrumento respuesta vs. Figura 1, el área de pico es 27.315 para cafeína y 18.852 de ácido palmítico.
3. Es una medida de la eficiencia de la columna N, el número de platos teóricos. N puede calcularse a partir del cromatograma para cada pico. Figura 1, N es 283.000 para cafeína y 261.000 de ácido palmítico.
4. La figura 2 muestra el efecto de la temperatura en separaciones isotérmicos. Dos separaciones son overlaid de la misma muestra de cafeína y ácido palmítico. La primera es a 180 ° C y la segunda a 200 ° C. Los tiempos de retención son mucho menores para el funcionamiento a temperaturas elevadas.

Figura 1. Análisis de GC-FID de muestras cafeína y ácido palmítico. La cafeína 5 mM estándar elutes en primer lugar, seguida por la muestra de 1 mM de ácido palmítico. La rampa de temperatura fue 0,1 min a 150 º C seguido de una rampa de 10 ° C/min a 220 ° C donde la temperatura se llevó a cabo durante 5 minutos.

Figura 2. Análisis de GC-FID de carreras isotérmicas de una muestra de café de tueste oscuro. Una comparación de GC-FID corre a 180 ° C y 200 ° C para una muestra de café de tueste oscuro. Los picos elución mucho más rápidamente con la temperatura de 200 ° C.