Identificación de roedores I

La identificación adecuada de los animales de laboratorio es un requisito fundamental de la investigación biomédica. Es esencial que los investigadores sean capaces de distinguir entre animales individuales para que se utilice el animal correcto para los procedimientos experimentales y la recopilación de datos. Los científicos han desarrollado varios métodos permanentes y temporales para identificar animales de laboratorio individuales. Aquí, vamos a discutir los dos métodos más utilizados: el marcaje de orejas y el puñetazo en las orejas.

Antes de profundizar en el procedimiento para golpear la oreja, presentemos el código de punzón en la oreja, los tipos de puñetazos disponibles y analicemos los beneficios y desventajas de este método. Como habrás adivinado, el puñetazo en la oreja consiste en hacer un agujero o una muesca en la oreja externa o el pabellón auricular del animal. Con el fin de estandarizar este método, se han desarrollado códigos universales de perforación de orejas.

Dependiendo de la posición, las muescas en la oreja derecha representan un solo dígito, como 1, 3 y 5, y una muesca doble representa 2. Usando diferentes combinaciones de estas muescas, y sumando el valor de cada muesca, puedes etiquetar al animal del 1 al 9. Del mismo modo, en la oreja izquierda, las mismas muescas representan las decenas. Y de nuevo, diferentes combinaciones cubrirán el rango de 10 a 90. Los agujeros en el centro del pabellón auricular derecho e izquierdo representan 100 y 200, respectivamente. Y los agujeros en ambos indican 300. Por lo tanto, por ejemplo, si desea etiquetar al animal como 173, debe hacer un agujero en el centro de la oreja derecha para 100, tres muescas en el año izquierdo que sumen el total de 70, y una sola muesca en la oreja superior derecha que representa el lugar de la unidad "tres".

Ahora, analicemos los tres estilos de punzones de oreja disponibles comercialmente: el punzón de tijera, el punzón de pulgar y el punzón de palanca. Cada uno de estos tiene sus ventajas y desventajas.

El punzón del pulgar requiere un movimiento de pellizco, pero es lo suficientemente pequeño como para caber en un tubo Eppendorf para que el tejido de la oreja se pueda recoger más fácilmente. Ergonómicamente, el punzón de palanca es más fácil de usar que el punzón de pulgar, especialmente para las orejas más gruesas de las ratas mayores. El punzón de tijera no requiere un movimiento de pellizco, evitando así la fatiga y las lesiones del túnel carpiano.

A pesar de ser un método rápido y sencillo de identificación, el puñetazo en las orejas tiene algunas limitaciones. En primer lugar, el código de punzón en la oreja mencionado anteriormente tiene un límite superior de 399, lo que puede limitar el uso de este método en algunos estudios a gran escala. Otra limitación es que la mayoría de los animales deben ser agarrados por el pescuezo para poder leer el código, lo que aumenta las veces que se manipulan. A medida que las ratas envejecen, la piel de sus orejas se engrosa y es difícil realizar un puñetazo en la oreja sin causar un sufrimiento significativo al animal. Por lo tanto, es mejor realizar los puñetazos en las orejas en ratas jóvenes a medida que se destetan. En el caso de las ratas adultas que requieren identificación, se debe considerar el uso de anestesia inhalante al realizar puñetazos en los oídos.

Ahora que tiene información básica sobre el código de puñetazo en la oreja y los tipos de herramientas disponibles, aprendamos cómo realizar esta técnica en ratones.

Antes de comenzar el procedimiento, se recomienda que las herramientas de punzonado se limpien con una solución desinfectante, se enjuaguen con alcohol y se sequen completamente. Evite esterilizar los puñetazos en las orejas en autoclave, ya que eventualmente los desafilará.

Para empezar, decide el código experimental del animal y el punzón que se va a utilizar. Usemos el código 173 y el punzón de tijera como ejemplos aquí. El mismo procedimiento es aplicable a cualquier otro código o perforación. Cuando esté listo, sujete al animal agarrándolo por el pescuezo para que las orejas sean fácilmente accesibles. Comience con el agujero para 100. Coloque la oreja derecha en el punzón de modo que el orificio del punzón quede lejos del margen del pabellón auricular. A continuación, aplique presión para cerrar la tijera de forma rápida y firme para cortar la piel. Luego, suelta el puñetazo y retíralo de la oreja. Evite tirar o retorcer el punzón para evitar desgarrar la oreja. Para hacer una muesca, coloque el punzón en el borde del pabellón auricular en el lugar correcto, en este caso en la parte superior de la oreja derecha para el "tres" en el lugar de la unidad del código, y haga lo mismo: aplique una presión rápida y firme y luego abra la tijera para quitarlo. Repita el mismo procedimiento en la otra oreja para perforar tres muescas: dos para "20" cerca de la esquina exterior y una para "50" cerca de la esquina interior, totalizando el código a "70".

Confirme que se perforó el código correcto antes de volver a agregar el animal a la jaula. Nuevamente, limpie el punzón con un desinfectante, enjuague con alcohol y séquelo bien para evitar la oxidación.

Ahora, pasemos al marcaje de orejas, que es otro método económico y fácil de realizar para la identificación individual de ratones y ratas. Hay una variedad de crotales disponibles en el mercado. Estos incluyen: etiquetas de metal que tienen una serie de números y/o letras grabadas en ellas, y etiquetas de plástico con caracteres o códigos de barras sobre fondos de colores brillantes.

Una desventaja de las etiquetas metálicas es que a menudo es necesario levantar al animal para leer el código. Por el contrario, las etiquetas de plástico son fáciles de leer sin tener que manipular a los animales. Otra ventaja de las etiquetas de plástico es su compatibilidad con las imágenes de resonancia magnética. Si bien las etiquetas proporcionan un identificador individual para un ratón o una rata, no son infalibles. Las etiquetas pueden perderse debido a un aseo excesivo, dermatitis o infección, autotrauma infligido al tratar de quitar las etiquetas debido a la intolerancia, peleas y comportamiento agresivo de reproducción. Si hay varios animales en la misma jaula, la pérdida de un crotal puede ser problemática. Para evitar este problema, se debe utilizar una forma secundaria de identificación, como un código perforado en la oreja opuesta a la etiqueta. Un centro debe estandarizar tanto la elección de la oreja que se va a marcar como el código que se va a utilizar en la otra oreja, y todos los códigos deben indicarse en la tarjeta de la jaula.

Ahora aprendamos cómo colocar correctamente una marca en la oreja, ya que una posición incorrecta puede tener varias consecuencias desafortunadas. Después de la aplicación, también discutiremos la extracción de la marca auricular, que generalmente se realiza en caso de una infección debido a la aplicación de la etiqueta.

El primer paso es seleccionar una etiqueta adecuada para los animales que se van a identificar. Aquí, usaremos una etiqueta de metal para demostrar el procedimiento en ratones. Asegúrese de pedir el aplicador que sea apropiado para el tamaño y estilo específicos de los crotales que se utilizan. Retire suavemente la etiqueta del soporte de cartón y oriéntela en el aplicador de modo que el extremo con el orificio se coloque sobre el área con muescas del aplicador. El extremo puntiagudo de la etiqueta debe estar opuesto a la muesca.

Cuando esté listo para colocar el crotal, sujete al animal para que las orejas sean fácilmente accesibles. Es menos probable que los animales tengan dificultades si las extremidades traseras pueden descansar sobre una superficie como la parte superior de la jaula o una encimera. Una vez que el animal esté sujeto, coloque la punta de la etiqueta auricular profundamente en la concha de la oreja de modo que los números de la etiqueta miren hacia la parte posterior del animal. Luego, apriete firmemente el aplicador para cerrarlo; La etiqueta de la oreja perforará la oreja y se bloqueará. Cuando lo suelte, la oreja marcada se caerá del aplicador. Confirme que la etiqueta se ha colocado y aplicado correctamente. Si prefiere tener los números de la etiqueta de la oreja mirando hacia la nariz del animal, coloque la punta de la etiqueta en la base del pabellón auricular en la parte posterior de la oreja y luego apriétela para bloquear la etiqueta en su lugar.

Las etiquetas deben colocarse de manera que no causen una flexión en la oreja, interfieran con la movilidad del animal o se enganchen en cualquier parte de la jaula. Si la etiqueta se coloca demasiado cerca del borde de la oreja, puede romperse fácilmente. Si se coloca demasiado cerca de la cabeza, la piel del área del cuello puede engancharse en la marca, creando irritación, dolor y movimiento restringido, lo que puede provocar un autotraumatismo. En ocasiones, los papilomas metálicos pueden causar irritación e hinchazón del oído. Esto a menudo conduce a infecciones del pabellón auricular, y el tratamiento inmediato debe incluir la eliminación de la etiqueta.

Para quitar la etiqueta, humedezca un aplicador con punta de algodón con una solución antiséptica y úselo para eliminar cualquier residuo alrededor de la etiqueta. En casos graves de infección, el animal puede necesitar anestesia. Luego, con un cortador de alambre, corte la parte superior del bucle de etiqueta de borde a borde. Es importante destacar que no corte la superficie plana, ya que eso comprimirá la etiqueta, pellizcará la oreja y causará daños en la oreja. Usando hemostáticos, guíe suavemente el crotal a través y fuera de la oreja. Deslice la etiqueta hacia afuera para que el extremo engarzado no pase a través de él, causando un traumatismo y el agrandamiento del orificio de perforación. Una vez que la etiqueta haya desaparecido, limpie la oreja con un aplicador de algodón empapado en antiséptico y devuelva al animal a su jaula. Si hay una secreción purulenta del oído, puede ser necesario un tratamiento de seguimiento y se recomienda consultar con el personal veterinario para su evaluación.

Ahora que ya sabes cómo marcar a los animales de laboratorio con crotales y punzones, vamos a repasar algunos experimentos en los que estos métodos pueden ser útiles. Una de las principales ventajas de utilizar el código de punzón de oreja es que los punzones pueden funcionar como muestras de tejido para el genotipado, lo que reduce el estrés de los animales debido a la manipulación repetida. Sin embargo, si planea usar los punzones para recolectar muestras de PCR, recuerde primero remojar el aparato en una solución descontaminante de superficies durante al menos 3 minutos para eliminar el ADN o ARN residual, y luego enjuague con alcohol antes de usarlo.

La importancia de la técnica de identificación aumenta aún más si el experimento dura varios días. Por ejemplo, en este experimento, los científicos primero marcaron a los animales con una etiqueta de metal y luego inyectaron el nervio ciático con una suspensión de células tumorales transgénicas que expresaban la proteína luciferasa. A continuación, con el fin de cuantificar la progresión del cáncer, tomaron imágenes de los animales utilizando bioluminiscencia a uno, diez y dieciocho días después de la inyección.

Acabas de ver la presentación de JoVE en la que se demuestran los dos métodos de identificación más utilizados en los roedores: los crotales y los puñetazos en las orejas. Ahora debe comprender el código de punción en la oreja, conocer los diferentes tipos de marcas en las orejas de roedores disponibles en el mercado y debe poder realizar estos procedimientos con precisión sin causar molestias significativas a los animales.

Recuerde, cada técnica tiene sus ventajas y desventajas, que deben considerarse en relación con sus necesidades experimentales. Además de tener en cuenta el coste, la facilidad de la técnica y el nivel de dolor para los animales deben ser algunas de las principales consideraciones a la hora de elegir el método de identificación adecuado. Como siempre, ¡gracias por mirar!