Question 1

¿Qué sucede cuando la luz pasa a través de una muestra en la espectroscopía UV-Vis?

Accepted Answer

Cuando la luz pasa a través de una muestra, algunas longitudes de onda son absorbidas por moléculas mientras que otras son transmitidas. La transmisión es la relación entre la intensidad de luz transmitida y la intensidad de luz incidente. La absorbancia, calculada como A = -log(T), indica cuánta luz absorbió la muestra. Esta medida de absorbancia forma la base tanto para identificar compuestos como para cuantificar sus concentraciones.

Question 2

¿Cómo se relaciona la Ley de Beer la absorbancia con la concentración de la muestra?

Accepted Answer

La ley de Beer establece que la absorbancia es igual al coeficiente de atenuación molar multiplicado por la longitud de la trayectoria y la concentración. El coeficiente de atenuación molar refleja la capacidad de un compuesto para absorber luz a una longitud de onda específica. Las cubetas estándar tienen una longitud de trayectoria de 1 cm. Esta relación permite calcular la concentración de la muestra si se conoce la absortividad, o se puede usar curvas de calibración principios y aplicaciones para determinar concentraciones desconocidas.

Question 3

¿Por qué cada molécula tiene un espectro de absorbancia único?

Accepted Answer

Cada espectro de absorbancia único de la molécula resulta de su estructura química distinta, que determina la brecha de banda, la diferencia de energía entre estados fundamentales y excitados. Cuando la energía de un fotón coincide exactamente con esta brecha de banda, la molécula lo absorbe y hace la transición a un estado de energía más alto. Diferentes estructuras moleculares tienen diferentes brechas de banda, produciendo patrones de absorbancia característicos en longitudes de onda específicas.

Question 4

¿Qué componentes del equipo seleccionan longitudes de onda específicas en un espectrofotómetro UV-Vis?

Accepted Answer

Un monocromador separa espacialmente las longitudes de onda de la luz y posiciona una rendija de salida donde emerge la longitud de onda deseada. Alternativamente, los filtros pueden seleccionar longitudes de onda específicas. La mayoría de los espectrofotómetros utilizan una lámpara de deuterio para el rango UV (170–375 nm) y una lámpara de filamento de tungsteno para el rango visible (350–2,500 nm). El monocromador puede escanear a través de rangos de longitud de onda para generar espectros de absorbancia completos.

Question 5

¿Cómo se prepara una muestra y un blanco para la medición UV-Vis?

Accepted Answer

Primero, prepare un blanco llenando una cubeta limpia con el solvente de la muestra y limpiándola por fuera con papel libre de pelusa. Inserte la cubeta en el espectrofotómetro con los lados ranurados fuera del trayecto del haz y asegure la tapa. Mida y registre la absorbancia del blanco. Luego enjuague la cubeta dos veces con la muestra, llénela aproximadamente a tres cuartas partes, límpiela y mida la absorbancia de la muestra en la misma longitud de onda. Reste la medición del blanco de la muestra.

Question 6

¿Cómo puede la espectroscopía UV-Vis medir la cinética de reacción?

Accepted Answer

La cinética de reacción se mide tomando repetidas mediciones de absorbancia UV-Vis en el máximo de absorbancia a lo largo del tiempo. Registre una lectura inicial de absorbancia antes de que comience la reacción. Después de agregar el reactivo y mezclar, mida la absorbancia a intervalos regulares. A medida que avanza la reacción, los cambios en la absorbancia reflejan cambios en la concentración del compuesto, lo que le permite seguir el progreso de la reacción y determinar cuándo se completa.

Question 7

¿Cuáles son las aplicaciones comunes en laboratorio de la espectroscopía UV-Vis?

Accepted Answer

La espectroscopía UV-Vis cuantifica proteínas usando ensayos Bradford con colorante azul Coomassie a 595 nm o absorbancia directa de proteínas a 280 nm. Mide la densidad celular bacteriana mediante la densidad óptica a 600 nm, donde un OD600 de 1 indica aproximadamente 8 × 10⁸ células por mL. También cuantifica contaminantes ambientales como óxidos de nitrógeno midiendo complejos de colorantes azoados. Estas aplicaciones demuestran la versatilidad de UV-Vis en campos biológicos, ambientales y analíticos.

Espectroscopía ultravioleta-visible (UV-Vis) - Cuestionario de evaluación