Administración de compuestos IV

La intracardíaca, la retroorbitaria y la almohadilla para los pies son algunos de los métodos de inyección especializados que los investigadores biomédicos utilizan para los experimentos que requieren la administración de compuestos a través de estas rutas atípicas.

Una inyección intracardíaca administra el compuesto en el ventrículo izquierdo, lo que permite que la sustancia ingrese directamente a la circulación arterial. La ruta retroorbital es una alternativa a la inyección en la vena de cola y se utiliza para administrar el compuesto a la circulación venosa. Y una inyección de almohadilla para las patas implica la administración subcutánea del artículo en la pata trasera del animal. Este video ilustrará las consideraciones, procedimientos y aplicaciones de estas técnicas especiales de inyección.

Comencemos con algunos antecedentes y cosas que uno debe considerar antes de comenzar estos procedimientos de administración.

La administración intracardíaca a menudo se realiza mediante el uso de un ultrasonido para guiar la aguja hacia la ubicación correcta en el corazón. Sin embargo, si se realiza correctamente utilizando los puntos de referencia adecuados, la administración se puede realizar sin el uso de la visualización de ultrasonido. Tenga en cuenta que el procedimiento requiere el uso de un anestésico general, y solo se permite una inyección por animal para los procedimientos de supervivencia. Generalmente se utiliza una aguja de calibre 27-30 para esta inyección y el volumen máximo de administración es de 100 y 300 microlitros para ratones y ratas, respectivamente.

Para la inyección intravenosa a través de la vía retroorbitaria, se debe tener una comprensión justa de la estructura venosa orbitaria. Un ratón tiene un seno en el que convergen varias venas, a saber, la supraorbitaria, la nasal dorsal, la palpebral inferior y la temporal superficial. Mientras que en las ratas, hay una red o plexo de varias venas. La inyección se realiza directamente en los senos paranasales o en el plexo. Al igual que el intracardiaco, este procedimiento también requiere el uso de anestesia general, y solo se recomienda una inyección por ojo por día con un total de dos inyecciones por ojo para los procedimientos de supervivencia. Al igual que con todas las inyecciones, se debe seleccionar la aguja de tamaño más pequeño, generalmente de calibre 27-30, y el volumen máximo recomendado es de 150 ? L por ojo.

A pesar de la controversia, el uso de la inyección de almohadillas para los pies todavía es necesario para algunos estudios, generalmente relacionados con la inflamación y el crecimiento tumoral. Tenga en cuenta que las inyecciones solo se pueden realizar en un pie, nunca bilateralmente. Y las mediciones de las almohadillas para los pies deben realizarse diariamente tan pronto como se haya producido una hinchazón evidente. Se recomienda una aguja de calibre 29-30 para la inyección y el volumen máximo recomendado es de 50 μL. Después de cualquier inyección, todos los animales deben ser monitoreados de cerca para detectar signos de dolor, nivel de consumo de alimentos y deambulación normal. Por lo general, el animal debe ser sacrificado cuando la lesión o el tumor interfiere con la capacidad del animal para deambular o alcanzar la comida y el agua.

Ahora aprendamos los procedimientos de inyección, comenzando con la inyección intracardíaca. Demostraremos el procedimiento en un ratón, pero los puntos de referencia y el protocolo para una rata son similares.

El primer paso es preparar la jeringa. Recuerde que una aguja de calibre 29 y una jeringa de 1 cc son apropiadas para ratones. Y el volumen máximo para la inyección intracardíaca es de 100 microlitros. Al extraer la solución, deje una pequeña cantidad de aire entre el émbolo y el material de inyección. Esto es para permitir que la sangre ingrese a la jeringa a medida que se coloca en el corazón.

Para empezar, anestesiar al animal con anestésicos inhalantes o inyectables. Revise las consideraciones para mantener la anestesia general en otro video de esta colección. A continuación, coloque al animal en decúbito dorsal sobre una plataforma aislada. Luego, pegue las extremidades delanteras a la plataforma y coloque un trozo de cinta adhesiva horizontalmente a través del abdomen por encima de las caderas. Esto es para estabilizar aún más al animal y evitar cualquier movimiento una vez que se ha insertado la aguja. A continuación, con un hisopo, humedece el pecho del animal con alcohol al 70%.

Para identificar el lugar de la inyección, primero ubique el xifoides y el esternón manubrium. A continuación, encuentra el punto medio entre los dos puntos de referencia. A 1-2 mm a la izquierda de este punto, se encuentra el hito de inserción de la aguja. Con un aplicador con punta de algodón, aplique povidona yodada para marcar el sitio de inserción de la aguja.

Para inyectar, dirija la aguja perpendicular a la mesa e insértela a una profundidad de unos 2 mm. Luego, aplique una contrapresión muy ligera al émbolo. Una sangre oxigenada de color rojo brillante debe ingresar al centro de la jeringa, lo que confirma la colocación adecuada. Sostenga la jeringa en el mismo lugar e inyecte el material de manera lenta y constante en el transcurso de 30 a 60 segundos. La inyección rápida puede provocar la aglomeración de las células y la obstrucción de las arterias, un choque en el sistema debido a que la temperatura de la sustancia es significativamente más baja que la temperatura corporal, o una expansión del ventrículo y una interrupción del ritmo cardíaco.

Una vez que el material haya eliminado la jeringa, retire la aguja lenta y cuidadosamente sin ningún movimiento lateral, ya que eso puede dañar los músculos del corazón. A continuación, suelte inmediatamente la cinta de las patas delanteras y el abdomen y coloque al animal en posición prona en una jaula limpia con un lecho lo suficientemente profundo como para actuar como capa aislante. Tenga en cuenta que la mitad de esta jaula de recuperación está en una fuente de calor y el animal anestesiado está situado en el lado calentado de la jaula. Esto evita la hipotermia y, a medida que el animal se recupera de la anestesia, podrá moverse del lado calentado según lo desee.

A continuación, aprendamos el método de inyección intravenosa utilizando el plexo retroorbitario en ratas. Una vez más, demostraremos el procedimiento en un ratón, pero los puntos de referencia y el protocolo para las ratas son similares.

Coloque la aguja adecuada en la jeringa seleccionada y rellene el material de inyección. Recuerde, generalmente se usaría una aguja de calibre 27-30 con la jeringa más pequeña posible y un volumen máximo de 150 microlitros.

Para iniciar el procedimiento, primero anestesia al animal. Luego, colóquelo sobre una superficie plana en posición de decúbito lateral. Ahora coloque el dedo índice en la parte superior de la cabeza y el pulgar en la mandíbula, y tire suavemente hacia atrás y hacia abajo. Esto es para tensar la piel y sobresalir el globo ocular. Tenga cuidado de no aplicar presión sobre la tráquea y restrinja el flujo de aire. Si planea inyecciones múltiples, aplique anestésico oftálmico tópico, como tetracaína o proparacaína.

Inserte la aguja en el canto medial del ojo a una temperatura de 45? ángulo con respecto a la nariz. La profundidad debe ser suficiente para penetrar en los tejidos conjuntivales y avanzar hacia la órbita ocular y hacia los senos paranasales. No debe encontrarse con el hueso en la parte posterior de la órbita. Para evitar la ruptura de los vasos sanguíneos, asegúrese de que la aguja tenga un movimiento mínimo una vez insertada. No aspire, ya que eso colapsará los recipientes. Inyecte el artículo de manera lenta y constante. A continuación, retire la aguja suavemente y aplique una ligera presión sobre el ojo para controlar el sangrado y proporcionar hemostasia.

Por último, revisemos el método de inyección de almohadillas para los pies en ratones y ratas. Para comenzar, coloque la aguja adecuada y llene la jeringa con el volumen correcto. Este procedimiento se puede realizar en animales conscientes.

Coloque al animal en un tubo de sujeción con una pata trasera aislada y extendida agarrando la piel por encima de la aguijón. Limpie el pie con agua o alcohol para eliminar los residuos antes de inyectarlo. Para evitar el vaso sanguíneo que corre a lo largo del pie, el punto de referencia de la inyección está en el centro, pero justo fuera de la línea media, más cerca de los dedos de los pies.

Coloque el bisel de la aguja en el lugar de la inyección, dirigiéndolo hacia el talón. Inyecte el artículo de forma lenta y constante para evitar la distensión rápida de los tejidos del pie. Esto hará que la almohadilla del pie se hinche a medida que el material de inyección llene ese espacio subcutáneo. En la pata de un animal pequeño, la hinchazón de la inyección puede extenderse hasta el talón, mientras que en un animal más grande será más localizada.

Después de la inyección, observe a los animales diariamente y si hay hinchazón persistente o si hay lesiones o tumores como resultado del protocolo experimental, luego, usando un calibrador, realice la medición de la almohadilla de los pies. Este instrumento mide el grosor del pie en milímetros y ayuda a cuantificar la hinchazón.

Ahora analicemos algunos ejemplos de experimentos que utilizan inyecciones intracardíacas, retroorbitales y de almohadillas para los pies.

Una de las muchas aplicaciones de la administración intracardíaca es el desarrollo de un modelo animal de metástasis cancerosas. Aquí, los investigadores utilizaron esta ruta para inyectar células tumorales que poseen propensión a la colonización ósea. En los días siguientes, estudiaron el crecimiento tumoral en los huesos utilizando técnicas de rayos X y fluorescencia. En otro estudio, se utilizó la ruta retroorbital para inyectar anticuerpos específicos que marcan a los neutrófilos. Luego, con la ayuda de imágenes intravitales, los científicos pudieron rastrear el patrón de migración de las células marcadas.

Por último, los investigadores a menudo usan la inyección de almohadillas para los pies para analizar la respuesta inflamatoria. En este experimento, los investigadores aislaron células mononucleares de sangre periférica de muestras de sangre humana, las mezclaron con diferentes antígenos de prueba e inyectaron las soluciones en la almohadilla de la pata del animal. Por último, realizaron mediciones del pie para cuantificar la respuesta de hinchamiento debida a diferentes antígenos.

Acabas de ver la última entrega de JoVE sobre las técnicas habituales y especializadas de administración de compuestos.

Solo para recapitular, en la primera parte revisamos la vía parenteral más común. En el segundo capítulo, discutimos los procedimientos enterales y tópicos. La tercera entrega se ocupó del primer conjunto de procedimientos atípicos como intradérmico, intranasal e intracraneal en neonatos. Por último, aquí discutimos tres rutas adicionales que los investigadores biomédicos utilizan en los laboratorios para fines específicos.

Después de ver esta serie deberías tener una comprensión mucho mejor de las diferentes técnicas de administración y también deberías conocer las consideraciones generales y específicas relacionadas con estos protocolos de administración de compuestos Como siempre, ¡gracias por mirar!