Procedimientos de atención básica

Dado que los ratones y las ratas representan más del noventa por ciento de los animales utilizados para la investigación biomédica, el cuidado adecuado de estos organismos es fundamental para el resultado de los experimentos. Estos procedimientos de cuidado comienzan desde el principio, con el desembalaje de los animales de los contenedores de envío, el cambio de jaula, el mantenimiento de las condiciones de alojamiento adecuadas, el suministro de una dieta adecuada y la garantía de un entorno adecuado. Aunque existen procedimientos generales que se aplican a la mayoría de los ratones y ratas en el laboratorio, algunos animales, como los que están inmunocomprometidos, requieren atención adicional para mantenerlos con fines experimentales.

Este video describirá los estándares y los procedimientos de cuidado esenciales para animales inmunocompetentes e inmunocomprometidos. Y, por último, ilustraremos algunos ejemplos de experimentos que muestran cómo los científicos utilizan este conocimiento para diferentes fines de investigación.

La recepción de animales de otras instituciones supone un riesgo para los animales que ya se encuentran dentro de la instalación, ya que durante el transporte, las cajas de transporte pueden entrar en contacto con agentes patógenos. Por lo tanto, se debe emplear un procedimiento adecuado al desempacar los contenedores de envío.

Antes de manipular cualquier animal, es importante usar el equipo de protección personal o EPP adecuado. El EPP mínimo que se debe usar es una bata de laboratorio, guantes, gafas de seguridad y una mascarilla de tipo quirúrgico que reducirá la exposición al polvo y los alérgenos. El siguiente paso es seleccionar las jaulas adecuadas para los animales que llegan. Luego, equipe la jaula con ropa de cama y materiales de anidación adecuados. Y lleve las jaulas preparadas a la sala de recepción con temperatura controlada, para que estén listas para el traslado antes de la llegada de los animales.

A la llegada del envío, coloque las cajas de transporte en un lugar seguro de la sala de recepción. Examine el recipiente en busca de daños y desinfecte las superficies exteriores para destruir cualquier patógeno dañino. Asegúrese de que el desinfectante esté en contacto con la caja durante al menos 15-30 minutos, según las recomendaciones del fabricante. Luego, coloque el contenedor en la Estación de Transferencia de Animales o ATS. Esta estación ofrece un flujo de aire unidireccional filtrado de aire de partículas de alta eficiencia, o HEPA, dentro del capó. HEPA protege al usuario de los alérgenos y protege a los animales del aire ambiental circundante, minimizando la posibilidad de contaminación. A continuación, abra el contenedor de envío y evalúe la salud general de los roedores. Tome nota de cualquier animal que parezca estar herido o enfermo. Después de eso, colóquelos en la jaula ya ensamblada en los tamaños de grupo adecuados, cubra la jaula con la tapa de la barra de alambre y asegure el divisor para crear dos áreas. Seleccione el alimento apropiado y colóquelo en un lado y deje el otro lado abierto para permitir una mejor circulación de aire. Por último, si los animales no se colocan en un estante con riego automático, agregue una botella de agua para garantizar un suministro de agua adecuado. Recuerde que el ATS debe desinfectarse al final de cada sesión y que el soplador debe estar apagado al desinfectar.

Para el cambio de jaula, coloque las dos jaulas, una jaula nueva con el material de cama adecuado y la jaula usada con los animales, en el ATS. Se puede transferir a los animales de la jaula antigua a la nueva jaula a mano o con el uso de una pinza acolchada. Ambos métodos han sido discutidos en otro video de esta colección. Recuerde que solo se puede abrir una jaula de animales a la vez. En el caso de los ratones machos o hembras con una camada, se ha demostrado que la transferencia del área de anidación de los ratones a la jaula limpia ayuda a los animales con la transición. Una vez que la parte superior de la jaula esté colocada en la nueva jaula, transfiera la comida de la parte superior de la jaula vieja a la nueva y agregue más comida si es necesario. A continuación, coloque la parte superior de la barrera y devuelva la jaula al estante. Es una buena práctica cambiar los guantes entre jaulas o entre grupos.

El procedimiento de desembalaje para los animales inmunodeprimidos es un poco diferente, ya que las cosas deben ser estériles. Se recomienda que el soplador dentro de la campana esté encendido al menos 24 horas antes de usarlo. Al igual que en el caso de los animales inmunocomprometidos, a la llegada del envío rocíe el contenedor con una solución desinfectante en la sala de recepción y déjelo sin abrir durante 15-30 minutos. En el ATS designado para ratones inmunocomprometidos, rocíe la campana de flujo laminar con etanol al 70% 30 minutos antes de manipular a los animales. Lo ideal es que dos personas participen en esta actividad de desembalaje: una persona sería el técnico estéril que llevaría la bata esterilizada con vapor y el doble par de guantes estériles para manipular a los animales utilizando técnicas asépticas, y la otra sería el técnico no estéril que llevaría una bata de aislamiento limpia y un par de guantes para manipular los artículos contaminados. Ambos deben usar una mascarilla, un gorro para el cabello y gafas de seguridad.

Antes de abrir el contenedor de envío dentro de la campana, coloque todos los suministros y la jaula en estos y rocíe su exterior con alcohol. Y a la llegada del envío, coloque la caja de animales recibida en el capó y rocíela también con etanol al 70%. Hay dos opciones para el almacenamiento en jaula estéril, ya sea el almacenamiento en jaula estándar que ha sido envuelto y esterilizado con vapor, o las unidades desechables que han sido esterilizadas mediante irradiación por el proveedor.

Inicie el procedimiento de desembalaje abriendo el alimento estéril, seguido de la apertura de la caja de transporte. En este punto, el manipulador debe desechar el primer par de guantes estériles. A continuación, la persona no estéril desenvuelve la jaula estéril y la pasa asépticamente al cuidador del animal, quien luego retira el capó y la tapa de la barra de alambre y los coloca boca abajo en la capucha. Posteriormente, el tubo sorbedor de la jaula se llena de agua en la estación ubicada en la campana. Por último, el cuidador del animal coloca al animal en la jaula, lo asegura con la tapa de la barra de alambre, agrega comida y coloca el capó en su lugar. Tenga en cuenta que el soplador de campana debe permanecer encendido en todo momento para mantener el ambiente estéril. Al final, la persona no estéril retira la jaula poblada de la capucha y la coloca en un estante adecuado. Para evitar una posible contaminación cruzada entre grupos, el cuidador del animal debe cambiar los guantes después de cada contenedor de envío.

Para el cambio de jaula de los animales inmunodeprimidos, la preparación de la capucha y las jaulas y el EPI son los mismos que para el desembalaje de estos animales. Y la técnica de transferencia es la misma que la de los animales inmunocompetentes, pero en condiciones estériles.

Ahora hablemos de las condiciones de alojamiento adecuadas para los animales, que es otro aspecto importante de la prestación de cuidados esenciales. Los ratones y las ratas se alojan principalmente en jaulas tipo caja de zapatos con un fondo sólido que contiene material de cama. La jaula típica para ratones proporciona 75 pulgadas cuadradas de espacio en el suelo, que es adecuado para un máximo de 5 ratones adultos. Por otro lado, una jaula para ratas tiene un área de 142 pulgadas cuadradas y es adecuada para 2 ratas adultas. Las jaulas estáticas generalmente se cubren con una tapa de barra de alambre y se agrega material de filtro sobre la parte superior de la jaula como un bonete. Las jaulas con ventilación individual, o IVC, también tienen una tapa y un bonete de barra de alambre, pero se colocan en un estante que proporciona flujo de aire a la jaula. Esto elimina la necesidad de cambiar la jaula con tanta frecuencia como las jaulas estáticas, lo que puede ser beneficioso para los animales inmunocomprometidos.

Todos los sistemas de jaula tienen una provisión para el suministro de alimentos y agua. Hay comederos colocados dentro de la jaula del animal o una sección de la tapa de la barra de alambre se usa para el almacenamiento de alimentos. Los alimentos deben colocarse de manera que no sean ensuciados por los animales. El agua generalmente se suministra a través de una botella de agua colocada en la parte superior de la jaula, o a través de una válvula de agua potable automática que es un componente incorporado de la jaula del animal. Para la opción de válvula de bebida, cuando la jaula está enganchada en un estante, el agua se transporta al tubo para un sistema de riego automático que está diseñado para satisfacer las necesidades del animal en toda la instalación del animal.

La Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio establece que todos los implementos de jaula deben desinfectarse al menos cada 2 semanas. Es posible que sea necesario cambiar algunas jaulas y accesorios con más frecuencia según lo dicte el nivel de olor y amoníaco en el recinto.

Ahora hablemos del suministro adecuado de alimentos y agua para los animales inmunocompetentes e inmunodeprimidos. Hay muchos piensos disponibles en el mercado con composiciones variables de proteínas, carbohidratos y grasas. Lo ideal es que los piensos contengan entre un 15 y un 19% de proteínas, un 44% de hidratos de carbono y un 4-9% de grasas. En el caso de los animales inmunodeprimidos, asegúrese de que el alimento haya sido esterilizado.

El agua del grifo, o ósmosis inversa, es decir, agua de ósmosis inversa, se puede utilizar para animales inmunocompetentes, pero para animales inmunodeficientes, el agua puede ser una fuente de contaminación y, por lo tanto, debe esterilizarse. La esterilidad en el agua se mantiene agregando 2 gotas de ácido clorhídrico 12 molar a 8 litros de agua de ósmosis inversa, lo que acidificará el agua a un pH de 2.5-3 y limitará el crecimiento bacteriano. Luego vierta el agua en botellas individuales y cúbralas con papel de aluminio. Coloque las tapas de las botellas con tubos sorbos por separado en una bolsa de autoclave y coloque todo en un autoclave para la esterilización por vapor.

Ahora analicemos las condiciones ambientales estándar esenciales para el cuidado de los animales.

A nivel de jaula, el alojamiento social es obligatorio a menos que esté justificado científicamente o si un animal es incompatible con todos los demás. Enriquecer el entorno con cabañas de papel y materiales de anidación permite que los animales exhiban comportamientos específicos de su especie, como la construcción de nidos y la excavación, lo que a su vez disminuye el nivel de estrés y aumenta el bienestar general de los animales. Los materiales de anidación también proporcionan un área para dormir que está saturada de feromonas calmantes que ayudan a albergar a varios ratones machos en la misma jaula. Como se mencionó anteriormente, mover el área de anidación a la jaula limpia al cambiar la jaula ayuda a prevenir la agresión, especialmente en los machos, ya que los animales se introducen en un nuevo entorno. En el caso de los animales desnudos atímicos, se debe considerar proporcionar ropa de cama adicional y materiales de anidación tipo papel triturado en sus jaulas para ayudar con la termorregulación.

A nivel de la habitación, la temperatura para ratones y ratas debe estar entre 68 y 79? F. El nivel de humedad de la habitación debe ser del 30 al 70%, ya que los niveles más bajos pueden dar lugar a una afección conocida como cola anillada. El tercer parámetro de la habitación es la iluminación. Esto incluye la intensidad de la luz y los ciclos. Normalmente, la habitación de los animales está configurada en un ciclo de luz de 12 horas / 12 horas de oscuridad. La intensidad de la iluminación debe variar de acuerdo con la actividad en la habitación. Cuando los técnicos están trabajando, se pueden utilizar niveles de iluminación más altos. Sin embargo, debe reducirse a aproximadamente 325 lux una vez que se concluya toda la actividad. Por último, el flujo de aire dentro de la habitación también debe controlarse cuidadosamente. Un mínimo de 10-15 cambios de aire 100% fresco deben ocurrir cada hora. Esto disminuye los microbios y los olores en la habitación de los animales.

Por último, veamos cómo los investigadores están utilizando este conocimiento sobre el alojamiento, la dieta y las preferencias ambientales de los animales de laboratorio en sus experimentos.

Como se mencionó anteriormente, los animales de laboratorio generalmente exhiben un comportamiento de construcción de nidos, lo que reduce el estrés, y los investigadores han utilizado esto como un indicador del bienestar animal. En este experimento en particular, los científicos desarrollaron un sistema imparcial para calificar el nido construido y luego lo utilizaron para estudiar el efecto de la temperatura ambiente en el comportamiento de construcción del nido. Como se puede observar, un aumento de la temperatura provocó una caída significativa en la puntuación, lo que pone de manifiesto el papel de la temperatura ambiente en el bienestar animal.

Dado que a los ratones y ratas les encantan los carbohidratos, los investigadores han utilizado piensos de diferentes formas para probar la función motora de los animales. Esto incluye el análisis de la destreza durante diferentes tipos de tareas de manipulación de alimentos y el examen del comportamiento de alcance después de intervenciones quirúrgicas o farmacológicas.

Por último, se sabe que los ratones y las ratas son nocturnos y no prefieren las zonas iluminadas. Los científicos utilizan este conocimiento para crear un entorno para estudiar la ansiedad en estas especies. Por ejemplo, aquí los investigadores introdujeron animales en un campo abierto simple y estudiaron el tiempo que pasaban los ratones de tipo salvaje y knockout en las zonas de campo interior y exterior, para analizar el efecto de la eliminación de genes en el comportamiento similar a la ansiedad.

Acabas de ver la introducción de JoVE a los procedimientos de cuidado esenciales para ratones y ratas. Ahora debería tener una mejor comprensión de las medidas que se deben tomar para garantizar que el medio ambiente y el manejo de estos animales no causen ningún daño a la salud de los animales y también debe saber cómo los investigadores pueden modificar estos parámetros para lograr diferentes objetivos científicos. Como siempre, ¡gracias por mirar!