1. examen externo del
debe realizarse un examen macroscópico externo del cuerpo, que incluye una inspección visual del cuerpo de las lesiones y masas, como el paso inicial en una necropsia. La capa de pelo debe examinarse para las áreas de pérdida de cabello. Los dientes y las uñas son evaluados por un crecimiento excesivo o desgaste. Cabe señalar una tinción de la piel en la boca, fosas nasales, ojos, anales y las aberturas genitales. Pruebas de cinta, raspado de la piel y pellejo exámenes deben realizarse para detectar parásitos externos (ver procedimientos).
2. La examinación gruesa interna de la cavidad abdominal
3. Órganos abdominales
4. Cavidad torácica
pulmones5. Cabeza
ojos deFuente: Kay Stewart, RVT, RLATG, CMAR; Valerie A. Schroeder, RVT, RLATG. Universidad de Notre Dame, en
muchos experimentos con animales se basan en pu…
1. examen externo del
debe realizarse un examen macroscópico externo del cuerpo, que incluye una inspección visual del cuerpo de las lesiones y masas, como el paso inicial en una necropsia. La capa de pelo debe examinarse para las áreas de pérdida de cabello. Los dientes y las uñas son evaluados por un crecimiento excesivo o desgaste. Cabe señalar una tinción de la piel en la boca, fosas nasales, ojos, anales y las aberturas genitales. Pruebas de cinta, raspado de la piel y pellejo exámenes deben realizarse para detectar parásitos externos (ver procedimientos).
2. La examinación gruesa interna de la cavidad abdominal
3. Órganos abdominales
4. Cavidad torácica
pulmones5. Cabeza
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La necropsia, es decir, el examen postmortem de los órganos, y la recolección de tejidos son componentes integrales de muchos experimentos de laboratorio, que se basan en los puntos de tiempo finales de recopilación de datos recopilados de los análisis de los órganos extraídos. Por lo tanto, es importante aprender la técnica correcta de necropsia diagnóstica y recolección de tejidos, ya que el procedimiento puede afectar significativamente la calidad de las muestras recolectadas. En esta presentación se revisará el método de disección y extracción de órganos abdominales, reproductivos y torácicos de animales de laboratorio.
Antes de comenzar con el procedimiento, se debe iniciar un formulario que incluya una historia completa del animal: número de identificación del animal, sexo, condiciones de alojamiento, fecha de nacimiento, fecha de muerte, número de estudio/protocolo y el nombre del Investigador Principal.
A continuación, prepare el área de disección. Coloque un revestimiento de banco, una bandeja de disección, instrumentos designados para la necropsia, que incluyen tijeras, pinzas, hoja de bisturí estéril, cortadores de huesos, sonda roma, espátula pequeña y material de sutura no absorbible. La recolección de órganos y tejidos para el examen histológico requiere que los tejidos se conserven en una solución fijadora. A menos que se especifique lo contrario, el fijador más utilizado es la formalina tamponada neutra al 10%. Tenga en cuenta que las muestras de tejido deben tener un grosor de 0,5-1 cm para permitir una penetración suficiente de la solución fijadora. La fijación evita la descomposición, la autólisis y la putrefacción; detiene cualquier reacción bioquímica en curso; y puede aumentar la resistencia mecánica y la estabilidad de los tejidos tratados.
El método de eutanasia del animal también puede afectar la calidad de las muestras. El método de eutanasia más utilizado para ratones y ratas es una sobredosis de gas de dióxido de carbono. Los animales se dejan en su jaula de origen, que se coloca en una cámara, y el CO2 se introduce gradualmente en la cámara a una tasa de desplazamiento del 10-30% del volumen de la cámara/min. Esto hace que los animales pierdan el conocimiento antes de la percepción del dolor que se asocia con la activación de los nociceptores por el ácido carbónico. A continuación, el flujo se mantiene en la cámara hasta que se produce un paro respiratorio y el animal muere.
Después de la eutanasia, primero realice un examen externo inicial inspeccionando visualmente el cadáver en busca de lesiones y masas, crecimiento excesivo de dientes o cualquier mancha de pelaje en la boca, narinas, orejas, ojos y las aberturas anales y genitales. Si se justifica, realice una prueba de cinta, raspado de la piel y exámenes de piel para detectar parásitos externos. Una vez finalizado el examen externo, es el momento de iniciar la necropsia, empezando por la cavidad abdominal. Tenga en cuenta que antes de extraer cualquier muestra de tejido es importante observar el órgano in situ.
Para comenzar a extirpar la piel, coloque un pequeño corte justo delante de la pelvis en las hembras y por encima del prepucio en los machos. Luego, usando la técnica de disección roma, afloje la piel de la fascia y el músculo. La disección roma es una técnica de disección anatómica en la que se separan los tejidos y se exponen las estructuras subyacentes sin cortar. En esta técnica, las tijeras se utilizan para separar los tejidos en lugar de cortarlos. Las puntas cerradas se introducen en el tejido y luego se abren para dividir el tejido a lo largo de los planos naturales. Este proceso requiere paciencia y un tacto delicado, ya que el estiramiento del tejido puede provocar daños en los órganos y vasos sanguíneos adyacentes. A continuación, extiende el corte hasta la barbilla. A continuación, realice cortes transversales anteriores a las extremidades traseras y posteriores a las extremidades anteriores, y utilice una disección roma para exponer la zona cervical y el tórax. Se debe tener especial cuidado para evitar la ruptura de los vasos yugulares y carotídeos del cuello.
En las hembras, con la piel extirpada, observar el tejido mamario desde la parte superior del esternón en el manubrio hasta la abertura genital en la superficie ventral; extendiéndose lateralmente a ambos lados. Las hembras lactantes o embarazadas tendrán un mayor volumen de tejido mamario y puede haber leche. Para extirpar las glándulas mamarias, agarre el borde del tejido con pinzas y use una disección roma para aflojar las uniones a la piel. Una vez que la glándula se ha separado, se puede colocar en una solución fijadora para su posterior análisis histológico.
En esta etapa, se pueden observar las glándulas salivales submandibulares, que están emparejadas y ubicadas en la mandíbula, extendiéndose a lo largo del cuello hasta el esternón manubrio. La extirpación de estas glándulas requiere una disección roma y un cuidado adicional cuando se trabaja en la región cervical para evitar la ruptura de los vasos sanguíneos. Una vez liberado de los músculos subyacentes, levante las glándulas y corte cualquier unión residual. Las glándulas requieren al menos un corte para permitir la penetración del fijador.
Además, se puede ver la tráquea, que se extiende desde la epiglotis hasta la bifurcación de los bronquios. Es un tubo cartilaginoso estriado que es flexible. Aunque normalmente es transparente, la eutanasia con CO2 puede causar acumulación de líquido en los pulmones y la tráquea que parece un líquido transparente espumoso. La grasa subcutánea también estará presente en esta zona. Evalúelo para determinar la cantidad y la deposición. Un animal obeso puede tener una gran cantidad de grasa y la piel puede sentirse engrosada.
Antes de abrir la cavidad corporal, observe los músculos abdominales, intercostales y expuestos del cuello y las extremidades, en busca de engrosamiento, masas o decoloración. Para abrir la cavidad corporal, primero haz un pequeño corte transversal en el punto más caudal del músculo abdominal expuesto. A continuación, levanta el músculo de los órganos y corta a lo largo de la línea alba hasta el xifoides. A continuación, disecciona los músculos lateralmente desde la línea media hasta justo por encima de las extremidades traseras a ambos lados. Por último, corta a lo largo de la curva de las costillas en ambos lados. Una vez abierta la cavidad corporal, evaluar la cantidad y acumulación de grasa abdominal. Un animal sano tendrá almohadillas de grasa abdominal y algo de grasa a lo largo de la superficie dorsal de la cavidad. Observe el color de este tejido y observe cualquier anomalía.
Ahora estamos listos para comenzar la cosecha de órganos abdominales. Comience por ubicar el bazo, que es de color rojo oscuro y se encuentra a lo largo de la curvatura inferior del estómago. Debe ser de forma regular y con una superficie ligeramente mate. Para extirpar el bazo, levante el órgano y corte las uniones al estómago.
El estómago se encuentra en el extremo distal del esófago. Parece ser de dos tonos, diferenciando las porciones muscular y glandular. Siéntelo por la presencia de comida. Se debe tener en cuenta el estómago vacío, ya que puede ser indicativo de enfermedad. No corte el estómago, ya que el contenido contaminará los órganos de la cavidad abdominal.
El intestino delgado está conectado distalmente e inferior al estómago. Hay tres secciones distintas del intestino delgado. Primero está el duodeno, una sección más corta desde el esfínter posterior del estómago hasta el comienzo del yeyuno. El conducto biliar entra aquí y el tejido pancreático se adhiere más firmemente a esta porción del intestino delgado. El yeyuno es la parte central. Las manchas de Peyer, que son pequeñas áreas ovaladas compuestas de tejido linfoide, se pueden observar en la superficie del yeyuno y el íleon. El íleon es la porción más larga del intestino delgado que termina en el ciego, ubicado en la unión de los intestinos delgado y grueso. El ciego tiene un color verdoso y es muy blando.
El intestino grueso continúa desde el ciego hasta el ano. Es fácilmente identificable ya que los gránulos fecales se pueden visualizar dentro de la luz de esta estructura. Los intestinos delgado y grueso están anclados al cuerpo por el mesenterio, una membrana que contiene vasos sanguíneos, grasa y ganglios linfáticos. Esto debe examinarse en busca de ganglios linfáticos agrandados y cualquier masa antes de la extirpación del tracto intestinal. El páncreas es un órgano difuso situado en la parte posterior del estómago. Es de color tostado claro a gris y está compuesto por múltiples lóbulos pequeños con bordes irregulares. Para extraer el páncreas, agarre el órgano y extraiga suavemente el tejido mesentérico circundante. Esto debe hacerse antes de la extirpación del tracto intestinal.
Para extirpar todo el tracto en una sola pieza, comenzando con el estómago y extendiéndose hasta el ano, primero coloque una ligadura en el recto y luego haga un corte a través del intestino grueso justo antes del ano. A continuación, coloque una ligadura en la unión del esófago y el estómago, tras lo cual se puede levantar todo el tracto intestinal y cortar las uniones membranosas. A continuación, se puede separar el conjunto del mesenterio, cortarlo en secciones y fijarlo.
Los riñones son órganos emparejados ubicados contra los músculos de la espalda. Deben tener el tamaño y el color de un frijol oscuro y tener una superficie lisa. Inmediatamente anterior al riñón se encuentra la glándula suprarrenal que aparece como un pequeño nódulo de color rosa claro.
Para extirpar un riñón, aíslelo con una pinza y haga un corte entre el órgano y el uréter. A continuación, se puede despegar la capa exterior resistente para examinar la superficie. Corta un riñón por la mitad a lo largo del eje largo y el otro transversalmente. Cualquier arenilla en su interior puede indicar la presencia de cristales o depósitos minerales. Por último, retire el hígado, que es de color rojo oscuro y sus márgenes deben ser lisos con un borde crujiente. Se debe tener cuidado al manipular el hígado, ya que es un tejido friable. Cualquier alteración de la integridad del órgano provocará que la sangre se filtre a la cavidad corporal y oscurezca otros órganos.
Para extirpar el hígado, primero refleje suavemente los lóbulos lejos del diafragma y haga un corte a través de los vasos sanguíneos anteriores a la estructura. A continuación, refleja el hígado hacia el diafragma y agarra el ganglio fibroso que conecta todos los lóbulos centralmente. Por último, levante el órgano mientras corta todos los adjuntos al tracto intestinal y al estómago.
El aparato reproductor femenino está formado por el útero y los ovarios. El útero es una estructura corta en forma de Y con cuernos que se extienden en ambas direcciones. Los cuernos terminan en las trompas de Falopio y los ovarios, ubicados justo debajo de los riñones. Los ovarios tendrán una superficie rugosa debido a las diferentes etapas de maduración de los folículos.
Para extirpar los ovarios, corte las inserciones arteriales anteriormente y la trompa de Falopio posterior. Para extirpar el útero, agarre y corte suavemente por debajo del cuello uterino. Después de la incisión, levante el cuerpo y los cuernos del útero rompiendo cualquier unión en la cavidad corporal.
En los hombres, también se pueden observar las glándulas prepuciales ubicadas justo antes del prepucio. Parecen grandes y son de un color gris a amarillento con una apariencia espumosa. La extirpación y fijación de estas glándulas es similar a la de las glándulas submandibulares. Además, el sistema reproductor masculino está formado por vesículas seminales, la glándula prostática y los testículos. Las vesículas seminales son estructuras blancas, en forma de cuerno de carnero, situadas en la parte anterior de la vejiga urinaria y unidas en la línea media de la glándula prostática.
La glándula prostática, generalmente de color bronceado claro, se encuentra alrededor de la vejiga urinaria en la base. Para visualizar los testículos, agarre las almohadillas de grasa abdominal ubicadas en la parte inferior del abdomen y tire de ellas hacia atrás. Esto extraerá los testículos del escroto para permitir el examen. La superficie debe ser lisa con una vascularización fina evidente en la superficie.
El epidídimo se encuentra a lo largo del margen inferior del testículo y se estrecha hacia la parte superior. El conducto deferente se une al extremo del epidídimo y conduce de vuelta a la próstata. Para extirpar los testículos, corte la unión en el escroto y corte los conductos deferentes. Para extirpar la próstata y las vesículas seminales, agarre la base de la vejiga urinaria y levántela mientras corta los inserciones debajo de la próstata.
Pasando a los órganos dentro de la cavidad torácica. Para exponer las estructuras vitales, retire el diafragma de la unión a las costillas. A continuación, corte la caja torácica lateralmente en ambos lados hasta la parte superior del esternón del manubrio, y luego refleje los huesos cranealmente para visualizar los órganos torácicos.
Los pulmones son normalmente de un color rosa brillante, de textura esponjosa con una superficie lisa. Sin embargo, la eutanasia con CO2 puede causar hemorragias pulmonares, lo que resulta en manchas de color rojo oscuro que pueden cubrir toda la superficie pulmonar.
El corazón es de color rojo oscuro y los ventrículos son musculosos, que se sienten firmes al tacto. Las aurículas son de color rojo más oscuro y se encuentran en la parte superior de los ventrículos. Son mucho menos musculosos y parecen flácidos. Una membrana delgada y translúcida llamada saco pericárdico rodea el corazón.
El timo se encuentra anterior al corazón y se asienta sobre la tráquea. Debe tener una textura suave. La tráquea se puede ver como se describió anteriormente, y el esófago es un tubo muy delgado que se encuentra directamente detrás de la tráquea y detrás del corazón y pasa a través del diafragma hasta el estómago.
Para extirpar los órganos de la cavidad torácica, comience agarrando la tráquea justo por encima del timo y haga un corte perpendicular justo delante de las pinzas. Mientras mantiene el agarre, levante la tráquea caudalmente y corte cualquier unión de los pulmones a la superficie espinal en la caja torácica. Es posible que sea necesario cortar el esófago para poder levantar el corazón y los pulmones de la cavidad torácica
Después de extraer el corazón para el cuerpo, enjuáguelo con solución salina para eliminar la sangre residual y los coágulos, o llénelo con el fijador a través de la aorta. Una vez extirpados los pulmones, se coloca una ligadura suelta alrededor de la tráquea. A continuación, enhebre una aguja unida a una jeringa que contiene el fijador en la luz de la tráquea y apriete la ligadura. A continuación, inyecte el fijador hasta que los pulmones estén inflados. Por último, retire la aguja y apriete más la ligadura para evitar fugas.
Con este soplo de conocimiento sobre la necropsia de roedores y la recolección de tejidos, veamos algunos de los experimentos de laboratorio actuales que involucran estos procedimientos.
La necropsia diagnóstica es un criterio de valoración común en los experimentos de metástasis del cáncer. En este ejemplo, los investigadores inyectaron células cancerosas en el bazo del roedor Luego, treinta o sesenta días después, realizaron una necropsia, que reveló metástasis hepáticas significativas.
La extracción de tejido suele ir seguida de un análisis histológico, que ayuda en el estudio de la anatomía microscópica de la muestra. Siguiendo el protocolo de fijación, incrustación, seccionamiento y tinción de tejidos, los investigadores pueden estudiar las estructuras microscópicas de estos órganos y descubrir el efecto de las intervenciones genéticas o farmacológicas a nivel atómico.
A veces, los investigadores extraen tejidos para estudiar procesos fisiológicos, como la angiogénesis. Aquí, los experimentadores exteriorizaron el tejido mesentérico de una rata para estimular el crecimiento vascular. Luego, recolectaron algunas secciones y las trataron con los marcadores que tiñen las células de cualquier vaso sanguíneo, para estudiar la dinámica celular involucrada en el crecimiento de la red vascular.
Acabas de ver el vídeo de JoVE en el que se detallan los pasos de la necropsia diagnóstica y la recolección de tejidos en animales de laboratorio. Es importante utilizar técnicas adecuadas para la extracción y preservación de órganos, de modo que el procedimiento de extracción no tenga ningún efecto en la interpretación de los datos recopilados. Como siempre, ¡gracias por mirar!
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Q1: Why is necropsy necessary when alternative research methods are available?
Necropsy is essential when new approach methodologies like organ-on-chip systems, organoids, and in silico models cannot capture whole-body effects such as metastasis, long-term toxicity, or causes of unexpected death. These alternatives lack the complexity to replicate systemic interactions, making necropsy critical for comprehensive postmortem analysis and understanding disease progression in living organisms.
Q2: What is the purpose of using 10% neutral buffered formalin in tissue preservation?
Neutral buffered formalin is the standard fixative used to preserve collected tissues for histological examination. It prevents tissue decay, autolysis, and putrefaction while stopping ongoing biochemical reactions and increasing mechanical strength and stability. Proper fixation is critical because tissue samples must be approximately 0.5-1 cm thick to allow sufficient penetration of the fixative solution.
Q3: How does the euthanasia method impact tissue quality in necropsy procedures?
The euthanasia method significantly affects sample quality. Carbon dioxide is commonly used because it causes animals to lose consciousness before pain perception, minimizing distress. However, CO2 euthanasia can cause fluid accumulation in lungs and trachea, appearing as frothy clear fluid, and may result in pulmonary hemorrhages visible as dark red splotches on lung surfaces, affecting histological interpretation.
Q4: What is blunt dissection and why is it important during necropsy?
Blunt dissection is a technique where scissors are used to spread tissues rather than cut them, with closed tips pushed into tissue and then opened to split along natural planes. This method requires patience and a delicate touch because it separates structures without cutting, preventing damage to adjacent organs and blood vessels that could compromise sample integrity and obscure pathological findings.
Q5: What organs should be examined in the abdominal cavity during necropsy?
Key abdominal organs include the spleen, stomach, small intestines (duodenum, jejunum, ileum), large intestine, cecum, pancreas, kidneys, and liver. Each organ requires careful observation for abnormalities in size, color, texture, or contents. The mesentery anchoring intestines should be examined for enlarged lymph nodes and masses. Changes in these organs may indicate inflammation, obstruction, infection, or other pathology affecting study results.
Q6: How are reproductive organs harvested differently in male and female rodents?
In females, the Y-shaped uterus with extending horns and ovaries located below kidneys are removed by cutting arterial attachments and the fallopian tube. In males, the seminal vesicles, prostate gland, and testes are harvested by grasping abdominal fat pads to expose testes, then cutting scrotal attachments and the vas deferens. Both require careful examination for changes in size, symmetry, color, or texture indicating disease.
Q7: What special technique is required when removing and preserving lungs during necropsy?
After lung excision, a loose ligature is placed around the trachea. A needle attached to a syringe containing fixative is threaded into the trachea lumen, the ligature is tightened, and fixative is slowly injected until lungs are gently inflated without overdistension. This crucial step prevents alveolar collapse and allows accurate histological assessment of lung tissue structure and pathology.
Capítulos en este video
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Preparatory Steps
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External and Internal Gross Examination
9:13
Abdominal Organs
14:20
Reproductive System
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Thoracic Organs
19:54
Applications
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Summary