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Necropsia diagnóstica y recolección de tejidos

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Diagnostic Necropsy and Tissue Harvest

5.7: Compound Administration II

5.15: Sterile Tissue Harvest

57,405 Views

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18:52 min

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April 30, 2023

Overview

Fuente: Kay Stewart, RVT, RLATG, CMAR; Valerie A. Schroeder, RVT, RLATG. Universidad de Notre Dame, en

muchos experimentos con animales se basan en puntos de tiempo de recogida de datos que se obtienen de la recolección y análisis de órganos y tejidos. El uso de métodos adecuados para la recolección de órganos y tejidos puede afectar la calidad de las muestras y el análisis de los datos recogidos para el análisis de los tejidos. El método de la eutanasia del animal también puede afectar a la calidad de las muestras. Este manuscrito describen técnicas de necropsia adecuada para las ratas.

Principles

el método de eutanasia más comúnmente utilizado para ratones y ratas es una sobredosis de gas dióxido de carbono (CO ₂). Acuerdo con la americana veterinaria médica Asociación (AVMA), el uso de CO ₂ es aceptable con las condiciones que reduzcan al mínimo la aversión y la angustia. ¹ los animales quedan en su jaula de casa, que se coloca en una cámara. CO ₂ se introduce gradualmente en la cámara a una velocidad de desplazamiento del 10% al 30% de la cámara volumen/min, que causa a los animales a perder el conocimiento antes de la percepción del dolor asociada con la activación del nociceptor por ácido carbónico. El flujo se mantiene en la cámara una vez que se ha producido detención respiratoria asegurar que el animal está muerto. Una sobredosis de una anestesia inhalante también es aceptable, especialmente para proyectos que requieren el uso de tejido pulmonar, como CO ₂ produce daños en el tejido pulmonar. Exsanguinación del animal también puede ser necesario para algunos experimentos reducir el volumen de sangre en los tejidos.

registro exacto de todos los resultados es esencial durante una autopsia. Debe iniciarse un formulario que registra una historia completa del animal, incluyendo la identificación de los animales, género, condiciones de vivienda, fecha de nacimiento, fecha de la muerte, número de número/protocolo de estudio y el nombre del investigador de principio. Se lleva a cabo un examen interno bruto como las cavidades del cuerpo son expuestas para revelar los órganos internos. Señalar cualquier anomalía evidente. ²

cosecha de necropsia y el tejido debe iniciarse inmediatamente después de la eutanasia del animal, como la salida bacteriana desde el tracto intestinal puede confundir algunos ensayos. Comenzando en la cavidad abdominal y hacia la cavidad torácica, se deben observar los órganos internos. Antes de retirar las muestras de tejido, es importante observar los órganos in situ. ² cosecha de órganos y tejidos para examen histológico requiere que los tejidos estén correctamente preparados. Las muestras de tejido para histología deben ser 0.5-1 cm de espesor para permitir la suficiente penetración de la solución fijadora. Fijación preserva tejidos biológicos, prevención de la caries, autólisis y putrefacción. También se detiene cualquier curso reacciones bioquímicas y puede aumentar la resistencia mecánica o la estabilidad de los tejidos tratados. El objetivo general de fijación de tejido es preservar las células y tejidos componentes para permitir la preparación de finas, secciones manchadas. A menos que se especifique lo contrario, el fijador más utilizado es el formol neutro tamponado al 10%. Formol tamponado neutro al listo para usar 10% está comercialmente disponible en principales proveedores. ³

figura 1. Órganos abdominales y torácicos de rata hembra.

figura 2. Órganos abdominales y torácicos de rata macho.

Procedure

1. examen externo del

debe realizarse un examen macroscópico externo del cuerpo, que incluye una inspección visual del cuerpo de las lesiones y masas, como el paso inicial en una necropsia. La capa de pelo debe examinarse para las áreas de pérdida de cabello. Los dientes y las uñas son evaluados por un crecimiento excesivo o desgaste. Cabe señalar una tinción de la piel en la boca, fosas nasales, ojos, anales y las aberturas genitales. Pruebas de cinta, raspado de la piel y pellejo exámenes deben realizarse para detectar parásitos externos (ver procedimientos).

Prueba de cinta
1. equipo necesario para una prueba de la cinta incluye guantes, una tira de cinta de celofán transparente, un portaobjetos de vidrio y tijeras.
2. Siempre guantes al manipular la cinta, como el pegamento se levante los aceites y las células de los dedos, la piel ocultando resultados o causar confusión al evaluar la diapositiva.
3. Cortar un trozo de cinta que es ligeramente más estrecho que el ancho y más corto que la longitud de la diapositiva del microscopio.
4. Con cuidado, presione el lado pegajoso de la cinta en el ano y el área circundante y quitar rápidamente it.
5. Usando el extremo opuesto de la cinta, presione entre los omóplatos y quitar rápidamente it.
6. Aplique la cinta en el portaobjetos.
7. La prueba de la cinta es preparada para la examinación microscópica. Huevos del parásito son visibles en 4 aumentos pero luego debe ser examinados con 10 aumentos para identificar correctamente las especies.
8. Es importante evitar tocar el lado adhesivo de la cinta. La cinta será levantar la suciedad de las manos enguantadas y hacer de la lectura de la diapositiva difícil.
Raspado de piel
1. el examen de raspado de piel se realiza en las áreas de alopecia, lesiones de piel o excoriación.
2. El equipo necesario para el raspado de piel es un portaobjetos de vidrio limpio, aceite mineral y una hoja de una espátula o bisturí metal.
3. Coloque unas pocas gotas de aceite mineral sobre el portaobjetos.
4. Pellizcar la piel un pliegue en el borde de la lesión o área de interés.
5. Colocar una pequeña cantidad de aceite mineral sobre la piel.
6. Coloque el borde de la hoja de una espátula o bisturí en la piel y raspar contra la dirección del crecimiento del cabello.
7. Continuar raspando hasta que una pequeña cantidad de enrojecimiento en la piel.
8. Colocar el pelo y el tejido raspado de la superficie de la piel en el aceite en el portaobjetos. Si es necesario, difundir el material que se distribuye uniformemente en el aceite.
9. La diapositiva está ahora lista para ser examinada bajo el microscopio. Si lo desea, puede aplicarse un cubreobjetos a la gota de aceite en la diapositiva. Examinar la diapositiva en 4 X y 10 aumentos.
Examen de pieles
1. el examen de la piel es el último examen externo realizado; sin embargo, se hace realidad después de completa el examen interno.
2. El animal se coloca en un vaso o plato de Petri de plástico después de que se han recogido todas las muestras de órganos internos.
3. El plato se coloca en el refrigerador durante 15 minutos.
4. Después de 15 minutos, el plato se coloca bajo un microscopio de disección y la piel se examina para parásitos externos. La mayoría de los ácaros de piel se moverá a los extremos de los pelos y se observan fácilmente.

2. La examinación gruesa interna de la cavidad abdominal

extirpando la piel
1. se hace una pequeña incisión justo anterior a la pelvis en las hembras y por encima del prepucio en los machos.
2. El corte de piel se extiende a la barbilla.
3. Disección Roma se utiliza para aflojar la piel de la fascia y el músculo.
4. Cortes transversales se hacen anterior las extremidades traseras y posterior a las extremidades delanteras. Debe tener cuidado de no romper los vasos sanguíneos en la zona axilar.
5. para exponer la zona cervical y tórax. Debe tener cuidado extra para evitar la ruptura de los vasos carótidos en el cuello y yugular.
Glándulas mamarias
1. en las hembras, examinar el tejido mamario para buscar masas, decoloración o anormalidades.
2. Hembras amamantando o embarazadas habrá aumentado el volumen de tejido mamario, y la leche puede estar presente.
3. Tejido mamario se encuentra entre la parte superior del esternón en el manubrio y la apertura genital en la superficie ventral y se extiende lateralmente a ambos lados tocando casi en la superficie dorsal en las caderas y los hombros.
4. La supresión de las glándulas mamarias requiere agarrando el borde de la glándula con el fórceps del pulgar y utilizando disección Roma para aflojar los archivos adjuntos a la piel. Una vez que la glándula se ha separado de la piel, tijeras de iris se pueden utilizar para cortar los restantes datos adjuntos antes de introducir la glándula en una solución fijadora.
Glándulas subcutáneas
1. las glándulas prepuciales son emparejadas y situadas justo anterior del prepucio en la rata macho. Aparecen grandes y son de un gris a un color amarillento con una apariencia espumosa.
2. Submandibular están emparejadas, situado en la mandíbula y se extienden a lo largo de la nuca hasta el esternón manubrio. Tienen una cubierta dura y firmemente se adhiere a los músculos.
3. Extirpación de estas glándulas requiere disección Roma y mucho cuidado cuando se trabaja en la región cervical para evitar la ruptura de los vasos sanguíneos. Disección Roma es una técnica de disección anatómica en que los tejidos están separados y las estructuras subyacentes expuestas sin cortes.
4. Para disección Roma, las tijeras se utilizan para extender tejidos apartes, en lugar de cortarlas aparte. Las puntas cerradas son empujadas en tejido y abrió para dividir el tejido a lo largo de planos naturales. Este proceso requiere paciencia y un toque delicado, como el estiramiento de los tejidos puede resultar en daño a órganos adyacentes y vasos sanguíneos.
5. Las glándulas, una vez liberadas de los músculos, se levantan y se cortó cualquier accesorio residual.
6. Las glándulas requieren al menos un corte para permitir la penetración del fijador.
7. Grasa subcutánea se evalúa para la cantidad y la deposición. Un animal obeso puede tener una gran cantidad de grasa con la piel engrosada. Animales que se deshidratan habrá reducido la elasticidad de la piel, y se sentirá más fino.
Músculo
1. observar la musculatura abdominal, intercostal y expuesta del cuello y extremidades. Tenga en cuenta cualquier engrosamiento anormal, masas o descoloración.
2. Si el músculo es necesario para el análisis, seleccione y recorte la muestra antes de tomar cualquier órganos abdominales para reducir la contaminación de la sangre.
Apertura de la cavidad del cuerpo
1. se hace una incisión transversal pequeña punto más caudal del músculo abdominal expuesto.
2. Levantamiento de los músculos de los órganos, cortar a lo largo de la linea alba a la xifoides.
3. Corte lateralmente, los músculos abdominales de la línea media justo por encima de los miembros posteriores en ambos partes.
4. Cortar el músculo abdominal a lo largo de la curva de las costillas en ambos lados.
Grasa abdominal
1. evaluar la cantidad y acumulación de grasa corporal. Un animal sano con almohadillas de grasa abdominales y algo de grasa a lo largo de la superficie dorsal en la cavidad abdominal. Un animal excesivamente delgado, o un animal muy joven, no tienen cantidades apreciables de grasa que rodea los riñones.
2. Observar el color de la grasa del cuerpo y note cualquier anormalidad.

3. Órganos abdominales

1. del hígado normalmente, el hígado color debería ser un color rojo oscuro. Los márgenes deben ser suave y tienen un borde nítido. Un hígado anormal tendrá un borde engrosado y puede tener muescas o bordes festoneados.
2. Debe tener cuidado al manipular el hígado, que es un tejido friable. Cualquier alteración a la integridad del órgano se traducirá en sangre que se escapa en la cavidad del cuerpo y oscurecimiento de los órganos.
3. Reflejar el hígado de la membrana y hacer un corte a través de los vasos sanguíneos anterior del hígado.
4. Reflejar el hígado hacia el diafragma y agarre el nodo fibroso que conecta centralmente todos los lóbulos del hígado. Levante el hígado mientras cortar todos los aditamentos que el tracto intestinal y el estómago.
5. Quitar el hígado en una sola pieza y luego exceso de sangre de la superficie del órgano. Puede ser colocado en un baño de solución salino, o enjuagarse con solución salina estéril, antes de cortar en secciones más delgadas para permitir la penetración del fijadores soluciones.
Vesícula
1. la vesícula es un pequeño saco transparente que aparece a menudo amarillo debido a la acumulación de la bilis. Está presente en los ratones, pero no en ratas.
2. La vesícula biliar se encuentra entre los lóbulos más superior del hígado a lo largo de la línea media. Generalmente está conectado con el diafragma por un frenillo fino que accidentalmente puede ser rasgado, causando la vesícula a.
3. La vesícula se puede quitar con el hígado y separó más tarde para su examen.
Bazo
1. el bazo es de color rojo oscuro y situado a lo largo de la curvatura menor del estómago. Se debe regular en forma, con una superficie ligeramente mate.
2. Es generalmente más grande en los machos que las hembras. Animales con parasitosis internas, infecciones bacterianas o enfermedades de la sangre pueden presentar agrandamiento de bazo.
3. Como los filtros de bazo dañan glóbulos rojos de la circulación, se llena de sangre. Cuando la extirpación del bazo, evitar perforar el órgano.
4. Para extraerlo, se levanta el bazo y los accesorios de corte entre el estómago y el bazo.
Tracto intestinal
1. cambios post mortem se producen rápidamente y acumulación de sangre en los tejidos, resultando en la aparición de moretones y la dilatación de los intestinos con gas, a menudo producido por crecimiento excesivo bacteriano. El tracto intestinal es examinado a fondo después de haber eliminado del cuerpo.
Estómago
1. el estómago está situado en el extremo distal del esófago. Parece que es dos tonos, diferenciando las porciones musculares y glandulares.
2. El estómago debe ser evaluado para la presencia de alimentos por sentir. Generalmente los roedores comen constantemente debido a una alta tasa metabólica. Cabe destacar un estómago vacío, ya que puede ser indicativo de enfermedad.
3. No cortar el estómago, como el contenido contaminará los órganos en la cavidad abdominal.
4. Para remover el estómago en el tracto intestinal, el esófago se cortó justo anterior del estómago. Si el estómago debe ser colocado en un recipiente común de fijador, un pedazo de sutura puede ser atado alrededor del esófago para evitar derrames del contenido de estómago antes de cortar.
Intestino delgado
1. el intestino delgado se compone de tres secciones: el duodeno, el yeyuno y el íleon. No contendrá pelotillas fecales.
2. El duodeno es un tramo más corto entre el esfínter del estómago posterior y el inicio del yeyuno. El conducto biliar entra en el intestino delgado en el duodeno, y el tejido pancreático se une más firmemente a esta porción del intestino delgado.
3. El yeyuno es la parte central del intestino pequeño.
4. Peyer ' s compuesto por parches de tejido linfoide en pequeños parches oval-son presentes en la superficie de la nonmesenteric del yeyuno y el íleon en la rata. ³ Estos son parte del sistema inmune y puede ser útiles en el diagnóstico de enfermedades inmunitarias.
5. El íleon es la porción distal del intestino delgado y es la parte más larga, terminando en el intestino ciego.
Ciego
1. el ciego tiene un color verdoso muy suave y.
2. Está situado en la ensambladura del pequeño e intestinos grandes.
3. a fermentar en el intestino ciego, por lo que la puntura del órgano dará como resultado un mal olor y la contaminación de los órganos con las bacterias.
Intestino grueso
1. el intestino grueso comienza en el intestino ciego y continúa hasta el ano. Es fácilmente identificable, como pellets fecales pueden visualizarse dentro del lumen del intestino.
2. No debe haber áreas de hemorragia o decoloración inmediatamente después de la eutanasia.
Mesenterio
1. los intestinos delgado y grueso están anclados al cuerpo por el mesenterio, una membrana que contiene vasos sanguíneos, grasas y los ganglios linfáticos.
2. Deben ser examinado para agrandamiento de ganglios linfáticos y cualquier masas antes de la remoción del tracto intestinal.
Páncreas
1. el páncreas es un órgano difuso localizado por debajo del estómago y entre los primeros pliegues del duodeno. Es un ligero bronceado color gris y compuesto por múltiples lóbulos pequeños con bordes irregulares.
2. No puede ser posible quitar el páncreas en una sola pieza.
3. Si el tejido pancreático está para ser cosechada, debe hacerse antes de la remoción del tracto intestinal.
4. Tejido identificado como pancreático debe ser cuidadosamente burlas de tejido mesentérico, que rodea todo
Eliminación del tracto intestinal
1. el tracto intestinal se quita como una sola pieza, empezando por el estómago que se extiende hasta el ano.
2. Un corte se hace con el intestino grueso, justo anterior del ano. Todo el tracto intestinal puede ser levantados y cualquier membranosos adjuntos roto. El tracto intestinal se puede quitar del mesentery, cortar en secciones y fijo.
3. Al colocar las secciones del intestino en frascos que contienen otros órganos, es imprescindible atar los extremos para evitar la contaminación de los tejidos con bacterias intestinales.
4. del lumen de la intestinal puede estar expuesto al reducir su longitud utilizando tijeras pequeñas de punta fina. El interior puede ser aclarado después de exponer a la luz de la.
5. Algunos estudios msí requieren que una porción del intestino se quita y lava en lugar de cortar. Asegurando una aguja Roma en un extremo del tejido suprimido, solución salina o fijador puede ser forzada en el intestino a vaciar el contenido.
Renal
1. los riñones son órganos pares ubicados contra la musculatura de la espalda. El riñón derecho es superior a la izquierda. Los riñones en los animales más viejos pueden estar rodeados de depósitos de grasa, haciéndolos difíciles de visualizar.
2. Es aproximadamente el tamaño y color de un frijol oscuro y su superficie debe ser lisa.
3. Inmediatamente anterior del riñón es la glándula suprarrenal, que aparece como un nódulo pequeño, rosa luz.
4. Para extraer el riñón, aislarlo usando un fórceps y corta entre el riñón y el uréter.
5. Los riñones tienen una cápsula externa dura que puede ser pelada apagado para visualizar mejor las superficies. Cortar transversalmente un riñón en mitad a lo largo del eje y el otro riñón. Nota cualquier arenilla en el riñón podría indicar la presencia de cristales o depósitos minerales.
Aparato reproductor femenino
1. el útero es una estructura en forma de Y. El cuerpo del útero es corto con los cuernos vinculados a la izquierda y derecha. Los cuernos terminan en las trompas de Falopio y los ovarios. En una hembra, los cuernos se rosa pálido y delgado. En un animal embarazado, los cuernos aparecerán más oscuro y han pronunciado vasos corriendo junto a los cuernos uterinos. Medida que avanza la gestación, los cuernos uterinos tendrá un " collar de perlas " aspecto. Los embriones en desarrollo creará un área pálido en el cuerno y que se desarrollan, se estira el útero y el tejido será más delgado, permitiendo visualización.
2. Los ovarios se encuentra justo debajo de los riñones. Tendrán una superficie rugosa debido a estadios diferentes de maduración de los folículos. Ovarios quísticos tienen vesículas llenas de líquido. Este líquido puede variar de paja coloreada a sanguínea.
3. Para quitar los ovarios, cortados los accesorios arteriales anterior y la trompa de Falopio posteriorly. Si lo desea, los ovarios se pueden sacar adjuntos al útero.
4. Para extirpar el útero, tiene que ser agarrada suavemente y la tracción aplicada para poder cortar por debajo del cuello del útero. Después del corte, levantar el cuerpo y los cuernos del útero, romper cualquier accesorio en la cavidad del cuerpo.
Sistema reproductor masculino
1. las vesículas seminales son blancas, ram ' s con forma de cuerno, empareja las estructuras situado anterior a la vejiga urinaria y atado en la línea media en la glándula prostática. El tamaño varía, pero pueden ser tan grandes como el ciego.
2. La próstata se encuentra alrededor de la vejiga urinaria en la base. Este tejido es en general un ligero bronceado. En animales más viejos, puede presentar hiperplasia. Los animales más viejos generalmente tendrá más grasa corporal que puede dificultar la visualización de la glándula de próstata.
3. Los testículos son emparejados y situados en las bolsas escrotales. La superficie debe ser lisa con la fina vascularización evidente en la superficie. Las ratas y ratones tienen un anillo inguinal o esfínter, que permite al animal a retirar los testículos en la cavidad abdominal. Para visualizar estos, agarre las almohadillas de grasa abdominales situadas en la parte inferior del abdomen y tire de ellas hacia delante. Esto empujará los testículos del escroto a examen. El epidídimo se encuentra en el margen inferior de los testículos y se va estrechando hacia la parte superior. El conducto deferente se une al final del epidídimo y conduce de nuevo a la próstata.
4. Eliminación de los testículos puede lograrse mediante el accesorio de corte en el escroto y cortar los conductos deferentes.
5. Quitar la próstata y las vesículas seminales requiere agarrando la base de la vejiga urinaria y elevación, mientras cortar los accesorios debajo de la próstata.

4. Cavidad torácica

pulmones

1. los pulmones son normalmente un color rosa brillante y esponjosa de textura con una superficie lisa. Sin embargo, la eutanasia con CO ₂ puede causar hemorragias pulmonares, resultando en manchas rojas oscuras que pueden cubrir la superficie del pulmón entero.
Corazón
1. el corazón es rojo oscuro con cuatro cámaras. Los ventrículos son musculares y sensación firmes al tacto. Las aurículas son rojo oscuro en color y en la parte superior de los ventrículos. Son mucho menos musculares y aparecen flácidos.
2. El saco pericárdico es una fina membrana transparente que rodea el corazón.
Timo
1. el timo se encuentra anterior al corazón y se sienta sobre la tráquea. Debe ser suave en textura.
2. En los animales jóvenes, aparece como tan con una textura grasosa.
3. Los animales más viejos tendrán infiltración de tejido adiposo en el timo, lo de agrandamiento y dando el timo de un color blanco.
Tráquea
1. la tráquea se extiende desde la epiglotis hasta la bifurcación de los bronquios. Es un tubo acanalado, cartilaginoso que es flexible.
2. Debe ser claro y no tiene ningún líquido o espumoso líquido en el lumen. Eutanasia con CO ₂ puede causar líquido (serosanguinous o espumoso) acumulación en los pulmones y la tráquea debido a la hemorragia.
Esófago
1. el esófago se extiende desde la cavidad bucal hasta el estómago. Es un tubo muy delgado que se encuentra directamente detrás de la tráquea y detrás del corazón y atraviesa el diafragma hasta el estómago.
2. El esófago es difícil de quitar, como que se rompe con facilidad a pesar de que el tejido es elástico. La extirpación del esófago se realiza más fácilmente por disección de la tráquea después de la eliminación de los pulmones y el corazón.
Eliminación de los órganos torácicos
1. el corazón y los pulmones se quitan más fácilmente a.
2. Coloca la pinza perpendicular a la tráquea y agarrar la tráquea firmemente, sobre el timo.
3. Con las tijeras, realizar un corte perpendicular a la tráquea justo anterior a las pinzas. Este corte debe cortar la tráquea y el esófago.
4. Sin aflojar la empuñadura en la tráquea, levante la tráquea caudalmente, y cortar los adjuntos de los pulmones a la superficie de la columna vertebral en la caja torácica.
5. El esófago puede necesitar ser cortado para poder levantar el corazón y los pulmones libres de la cavidad torácica.
6. Después de que el corazón se quita del cuerpo, puede ser lavado con solución salina para remover coágulos y sangre residual, o puede ser llenado con fijador a través de la aorta.
7. Una vez que los pulmones es suprimidos, se inflan con fijador. Una ligadura se coloca libremente alrededor de la tráquea. Se enhebra una aguja que está conectada a una jeringa que contiene el fijador de elección en el lumen de la tráquea. La ligadura se aprieta alrededor de la aguja y se inyecta el fijador hasta que se inflan los pulmones. Al retirar la aguja, se aprieta la ligadura para evitar fugas en.
Bucal
1. lengua
  1. la lengua de los roedores es lisa.
  2. Examinar la superficie de las lesiones, incluyendo la parte de abajo.
  3. La lengua rara vez se cosecha excepto para investigaciones especializadas tales como estudios de cáncer oral.
  4. Para sacar la lengua, cortar las superficies bucales a cada lado de la cavidad bucal a la articulación temporal mandibular.
  5. Dislocarse la mandíbula y reflejar el maxilar para revelar la epiglotis y la base de la lengua.
  6. Con unas pinzas para extender la lengua, cortar los accesorios debajo caudalmente a la base de la lengua.
  7. Mantener la tracción, corte horizontalmente en la base de la lengua a fREE de la cavidad oral.
2. Dientes
  1. dentado de rata consiste en tres molares y un incisivo en cada cuadrante que está separada por un diastema desdentado. Están recubiertos de esmalte solamente en el lado labial; en el interior del diente es la dentina.
  2. Rata dientes son normalmente un color amarillo y naranja. Este color es más pronunciada en el esmalte de los incisivos y es debido a la presencia de un pigmento que contiene hierro. El color comienza a aproximadamente 21 días después del nacimiento y se agrava con la edad.
  3. Examinar los dientes para sobrecrecimiento o maloclusión.

5. Cabeza

ojos de

1. los ojos deben ser iguales en tamaño y claro de exudado. La conjuntiva debe ser lisa.
2. Para quitar los ojos, aplique presión sobre la piel que rodea el ojo hacia atrás y hacia abajo sobresale el ojo de la órbita. Usando una pinza de punta curva, aislar del mundo y cortar los accesorios en la toma de.
Orejas
1. observar las orejas para la identificación. Alguna solicitud de los investigadores que etiquetas del oído se incluirán muestras de órgano para la confirmación de la identidad animal.
2. Los canales de oído son examinados por las lesiones, masas o exudado.
Nariz
1. la nariz se observa líquido o exudado.
2. Las fosas nasales deben ser simétrica y clara.

significado de necropsia autopsia de órganos- y cosecha de tejido son componentes integrales de muchos experimentos de laboratorio, que se basan en el tiempo de colección de datos final puntos de recogida de la Análisis de los órganos cosechados. Por lo tanto, es importante aprender la necropsia diagnóstico correcto y el tejido recolección técnica, el procedimiento puede afectar significativamente la calidad de las muestras recogidas. Esta presentación revisará el método de disección y extracción de órganos torácicos, abdominales y reproductivas de animales de laboratorio.

antes de comenzar con el procedimiento, una forma debe iniciarse que incluye una historia completa del animal: género número, identificación animal, condiciones, fecha de nacimiento, fecha de la muerte, estudio de la vivienda / número de protocolo y el nombre del investigador principio.

a continuación, prepare la zona de disección. Colocar una cubierta de banco, bandeja de disección, instrumentos designados para la autopsia, que incluye tijeras, pinzas, hoja de bisturí estéril, cortadoras de hueso, sonda Roma, pequeña espátula y material de sutura no absorbible. Cosecha de órganos y tejidos para la examinación histológica requieren que los tejidos se conservan en una solución fijadora. A menos que se especifique lo contrario, el fijador más utilizado es el 10% de formalina tamponada neutra. Tenga en cuenta que las muestras de tejido deben ser de 0.5-1 cm de espesor para permitir la suficiente penetración de la solución fijadora. La fijación evita caries, autólisis y putrefacción; detiene cualquier curso reacciones bioquímicas; y puede aumentar la resistencia mecánica y estabilidad de los tejidos tratados.

El método de la eutanasia del animal también puede afectar a la calidad de las muestras. El método de eutanasia más comúnmente utilizado para ratones y ratas es una sobredosis de dióxido de carbono. Los animales se quedan en su casa jaula, que se coloca en una cámara, y CO2 se introduce gradualmente en la cámara a una velocidad de desplazamiento de 10-30% del volumen/minuto de cámara. Esto hace que los animales a perder el conocimiento antes de la percepción del dolor que se asocia con la activación del nociceptor por ácido carbónico. El flujo se mantiene en la cámara hasta que se ha producido la detención respiratoria y el animal está muerto.

después de la eutanasia, primero realizar una examinación externa inicial inspeccionando visualmente el cadáver para lesiones y masas, crecimiento excesivo del diente o una tinción de la piel en la boca, fosas nasales, orejas, ojos y los orificios anales y genitales. Si se justifica, realizar una prueba de la cinta, raspado de la piel y lanzan exámenes para detectar parásitos externos. Una vez finalizado el examen externo, es momento de comenzar la autopsia, a partir de la cavidad abdominal. Tenga en cuenta que antes de quitar cualquier tejido lo muestras es importante para observar los órganos en situ.

Para comenzar suprimiendo la piel, coloque un pequeño corte justo anterior a la pelvis en las hembras y por encima del prepucio en los machos. Entonces, usando la técnica de disección Roma, afloje la piel de la fascia y el músculo. Disección Roma es una técnica de disección anatómica en que los tejidos están separados y las estructuras subyacentes expuestas sin corte. En esta técnica, las tijeras se utilizan para extender tejidos apartes en lugar de cortarlos aparte. Las puntas cerradas son empujadas en tejido y abrió para dividir el tejido a lo largo de planos naturales. Este proceso requiere paciencia y un toque delicado, como el estiramiento de los tejidos puede resultar en daño a órganos adyacentes y vasos sanguíneos. Luego ampliar el corte hasta el mentón. A continuación hacer, cortes transversales anterior las extremidades traseras y posterior a los miembros anteriores y realice una disección Roma para exponer la zona cervical y tórax. Debe tener cuidado extra para evitar la ruptura de los vasos carótidos en el cuello y yugular.

En las hembras, con la piel suprimida, observar el tejido mamario de la parte superior del esternón en el manubrio a los genitales de apertura en la superficie ventral, que se extiende lateralmente a ambos lados. Mujeres lactantes o embarazadas habrá aumentado el volumen de tejido mamario y la leche puede estar presente. Para suprimir las glándulas mamarias, sujete el borde de tejido con pinzas y realice una disección Roma para aflojar los archivos adjuntos a la piel. Una vez que se ha separado la glándula, puede ser colocado en una solución fijadora para análisis histológico posterior.

En esta etapa, se pueden observar las glándulas salivales submaxilares, emparejadas y situadas en la mandíbula, que se extiende a lo largo de la nuca hasta el esternón manubrio. Extirpación de estas glándulas requiere disección Roma y mucho cuidado cuando se trabaja en la región cervical para evitar la ruptura de los vasos sanguíneos. Una vez liberado de los músculos, levante las glándulas y cortar cualquier accesorio residual. Las glándulas requieren al menos un corte para permitir la penetración del fijador.

Además, se puede ver la tráquea, que se extiende desde la epiglotis hasta la bifurcación de los bronquios. Es un tubo acanalado, cartilaginoso que es flexible. Mientras que normalmente claro, eutanasia con CO2 puede causar acumulación de líquido en los pulmones y la tráquea que se parece a un líquido claro espumoso. Grasa subcutánea también estará presente en esta área. Evaluar para la cantidad y la deposición. Un animal obeso puede tener una gran cantidad de grasa con la piel engrosada.

Antes de abrir la cavidad del cuerpo, observar la musculatura abdominal, intercostal y expuesta del cuello y extremidades por masas, engrosamiento o decoloración. Para abrir la cavidad del cuerpo, primero hacer un pequeño transversal corte punto más caudal del músculo abdominal expuesto. Entonces levantar los músculos de los órganos y cortar a lo largo de la linea alba al xifoides. A continuación, disecar los músculos lateralmente de la línea media apenas sobre las extremidades traseras en ambos lados. Por último, cortar a lo largo de la curva de las costillas en ambos lados. Una vez abierta la cavidad del cuerpo, evaluar la cantidad y acumulación de grasa abdominal. Un animal sano tendrá cojines gordos abdominales y algo de grasa a lo largo de la superficie dorsal de la cavidad. Observar el color de este tejido y observar cualquier anormalidad.

ahora estamos listos para comenzar la cosecha de órganos abdominales. Comenzar por localizar el bazo, que es rojo oscuro y situado a lo largo de la curvatura menor del estómago. Se debe regular en forma y con una superficie ligeramente mate. Para quitar el spleen, levante el órgano y cortar los accesorios hasta el estómago.

El estómago está situado en el extremo distal del esófago. Parece que es dos tonos, diferenciando las porciones musculares y glandulares. Sentir presencia de alimentos. Cabe destacar un estómago vacío, ya que puede ser indicativo de enfermedad. Hacer no cortar el estómago, como el contenido contaminará los órganos en la cavidad abdominal.

Intestino delgado están conectados distalmente y inferior al estómago. Hay tres secciones del intestino delgado. La primera es el duodeno – un tramo más corto entre el esfínter del estómago posterior y el inicio del yeyuno. Entra aquí a la vía biliar y el tejido pancreático se une más firmemente a esta porción del intestino delgado. El yeyuno es la parte central. Peyer ' s parches, que son áreas ovales pequeñas compuestas de tejido linfoide, puede observarse en la superficie del yeyuno y el íleon. El íleon es la parte más larga del intestino delgado que termina en el ciego – ubicado en el cruce del pequeño e intestinos grandes. El ciego aparece verdoso en color y es muy suave.

El intestino continúa desde el ciego hasta el ano. Es fácilmente identificable como pelotillas fecales pueden visualizarse dentro de la luz de esta estructura. Los intestinos delgado y grueso están anclados al cuerpo por el mesenterio, una membrana que contiene vasos sanguíneos, grasa y ganglios linfáticos. Esto debe examinarse para agrandamiento de ganglios linfáticos y cualquier masas antes de la remoción del tracto intestinal. El páncreas es una posterior órgano difuso localizado en el estómago. Es un ligero bronceado color gris y compuesto por múltiples lóbulos pequeños con bordes irregulares. Para cosechar el páncreas, el órgano de agarre y suavemente la burlan del tejido circundante de la mesentérico. Esto debe hacerse antes de la remoción del tracto intestinal.

Para quitar todo el tracto como una sola pieza comenzando por el estómago que se extiende hasta el ano, primero colocar una ligadura en el recto y luego realizar un corte a través el intestino apenas anterior del ano. A continuación, colocar una ligadura en la Unión del esófago y el estómago, después de que se puede levantar todo el tracto intestinal y cualquier accesorio membranosa cortado. Todo se puede separa del mesentery, cortar en secciones y fijo.

Los riñones son órganos pares ubicados contra la musculatura de la espalda. Deben ser del tamaño y el color de un frijol oscuro y tienen una superficie lisa. Inmediatamente anterior del riñón es la glándula suprarrenal que aparece como un pequeño nódulo rosado luz.

Para quitar un riñón, aislarlo utilizando un fórceps y corte entre el órgano y el uréter. La capa externa dura se puede pelar apagado para examinar la superficie. Cortar transversalmente un riñón por la mitad a lo largo del eje y el otro. Cualquier grano dentro puede indicar la presencia de cristales o depósitos minerales. Por último, retire el hígado, que es un color rojo oscuro en color y sus márgenes deben ser lisos con un borde nítido. Debe tenerse cuidado al manejar el hígado, que es un tejido friable. Cualquier alteración a la integridad del órgano resultará en sangre que se escapa en la cavidad del cuerpo y ocultar otros órganos.

Para extraer el hígado, primero suavemente reflejan los lóbulos de la membrana y hacer un corte a través de los vasos sanguíneos anterior a la estructura. A continuación, reflejar el hígado hacia el diafragma y agarre el nodo fibroso que conecta los lóbulos central. Por último, levante el órgano mientras cortar todos los aditamentos que el tracto intestinal y el estómago.

el sistema reproductor femenino consiste en el útero y los ovarios. El útero es una estructura en forma de Y corta con cuernos que se extiende en ambas direcciones. Los cuernos terminan en las trompas de Falopio y los ovarios–situados justo debajo de los riñones. Los ovarios tienen una superficie áspera debido a estadios diferentes de maduración de los folículos.

Para quitar los ovarios, cortados los accesorios arteriales anterior y la trompa de Falopio posteriorly. Para quitar el útero, suavemente agarre y corte por debajo del cuello uterino. Después del corte, levantar el cuerpo y los cuernos del útero rompiendo cualquier accesorio en la cavidad del cuerpo.

En los machos, también se pueden observar las glándulas prepuciales situadas justo anterior del prepucio. Aparecen grandes y son de un gris a un color amarillento con una apariencia espumosa. Extracción y fijación de estas glándulas es similar a las glándulas submaxilares. Además, el sistema reproductor masculino consta de vesículas seminales, la próstata y los testículos. Las vesículas seminales son blancas, " ram ' cuerno de s en forma de " estructuras situado anterior a la vejiga urinaria y atado en la línea media en la glándula prostática.

La próstata–tan generalmente ligera en color–se encuentra alrededor de la vejiga urinaria en la base. Para visualizar los testículos, tome las pastillas grasa abdominales situadas en la parte inferior del abdomen y tire de ellas hacia delante. Esto empujará los testículos del escroto a examen. La superficie debe ser lisa con evidente en la superficie fina vascularización.

El epidídimo se encuentra en el margen inferior de los testículos y se va estrechando hacia la parte superior. El conducto deferente se une al final del epidídimo y conduce de nuevo a la próstata. Para quitar los testículos, cortar el accesorio en el escroto y cortar los conductos deferentes. Para quitar la próstata y las vesículas seminales, asirla por la base de la vejiga urinaria y levantarla mientras cortar los accesorios debajo de la próstata.

movimiento a los órganos dentro de la cavidad torácica. Para exponer las estructuras vitales, retire el diafragma de la fijación a las costillas. A continuación, cortar a través de la caja torácica lateralmente a ambos lados hasta la parte superior del esternón manubrio y luego reflejar los huesos cranially para visualizar los órganos torácicos.

Los pulmones son normalmente un color rosa brillante, esponjoso en textura con una superficie lisa. Sin embargo la eutanasia con CO2 puede causar hemorragias pulmonares resultando en manchas rojas oscuras que pueden cubrir la superficie del pulmón entero.

El corazón es rojo oscuro y los ventrículos son musculares, que sentirse firmes al tacto. Las aurículas son rojo oscuro en color y en la parte superior de los ventrículos. Son mucho menos musculares y aparecen flácidos. Una fina membrana transparente llamada el saco pericardial rodea el corazón.

El timo se encuentra anterior al corazón y se sienta sobre la tráquea. Debe ser suave en textura. Usted puede ver la tráquea como se describe antes, y el esófago es un tubo muy delgado que se encuentra directamente detrás de la tráquea y detrás del corazón y atraviesa el diafragma hasta el estómago.

Para quitar los órganos en la cavidad torácica, comienza sujetando la tráquea justo por encima de la timo y realice un corte perpendicular a anterior el fórceps. Manteniendo el agarre, levante la tráquea caudalmente y cortar cualquier accesorio de los pulmones a la superficie de la columna vertebral en la caja torácica. El esófago puede necesitar ser cortado para poder levantar el corazón y los pulmones libres de la cavidad torácica

después de que el corazón es removido para el cuerpo, lavarlo con solución salina para eliminar la sangre residual y coágulos, o llenarlo con el fijador a través de la aorta. Una vez que los pulmones son suprimidos, colocaron una ligadura suelta alrededor de la tráquea. Luego, enhebrar una aguja conectada a una jeringa que contiene el fijador en el lumen de la tráquea y apretar la ligadura. Luego inyecte el fijador hasta que se inflan los pulmones. Por último, retire la aguja y apriete la ligadura para evitar pérdidas.

con este aliento de conocimiento con respecto a la cosecha de tejido y necropsia roedor, que ' s ver algunas de the actual laboratorio experimentos con estos procedimientos.

Necropsia diagnóstico es un punto final común en los experimentos de metástasis de cáncer. En este ejemplo, los investigadores inyectan células cancerosas en el roedor ' bazo s, treinta a sesenta días más tarde, llevaron a cabo la autopsia, que reveló metástasis hepáticas importantes.

Extracción de tejido de

es a menudo seguida por análisis histológico, que ayuda en el estudio de la anatomía microscópica de la muestra. Siguiendo el protocolo de fijación, inclusión, corte y tinción de los tejidos, los investigadores son capaces de estudiar las estructuras microscópicas en estos órganos y descubrir el efecto de las intervenciones genéticas o farmacológicos a nivel atómico.

a veces los investigadores eliminar tejidos para estudiar los procesos fisiológicos, como la angiogénesis. Aquí, los experimentadores exteriorizada una rata ' tejido mesentérico s para estimular el crecimiento vascular. Entonces, cosechó algunas secciones y trataron con los marcadores que se tiñen las células de cualquier vaso sanguíneo, para el estudio de la dinámica celular implicada en el crecimiento de la red vascular.

te ' ve a Miró JoVE ' s vídeo detallando los pasos de la cosecha de necropsia y tejido diagnóstico en animales de laboratorio. Es importante utilizar las técnicas adecuadas para el retiro del órgano y preservación, para que el procedimiento de extracción no tiene efecto en la interpretación de los datos recogidos. Como siempre, gracias por ver!

Applications and Summary

el paso final en muchos proyectos de investigación es la necropsia de los animales experimentales. Una observación detallada de las estructuras externas e internas seguida por la colección de tejidos para su análisis posterior ofrece una gran cantidad de datos de la investigación. Técnicas adecuadas para la extracción de tejido y preservación con las soluciones de fijación apropiadas son esenciales para la correcta interpretación de los resultados.

References

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Fiette, L. and Slaoui, M. 2011. Necropsy and Sampling Procedures in Rodents. Drug Safety Evaluation: Methods and Protocols, 39-67.
Youngson, R.M. 2005. Collins dictionary of Medicine fourth edition.

Transcript

Necropsy-meaning postmortem examination of organs-and tissue harvest are integral components of many lab experiments, which rely on the final data collection time points gathered from the analyses of the harvested organs. Therefore, it is important to learn the correct diagnostic necropsy and tissue harvesting technique, as the procedure can significantly impact the quality of the samples collected. This presentation will review the method of dissection and extraction of abdominal, reproductive, and thoracic organs from lab animals.

Before starting with the procedure, a form should be initiated that includes a complete history of the animal: animal identification number, gender, housing conditions, date of birth, date of death, study/protocol number, and the name of the Principle Investigator.

Next, prepare the dissection area. Lay down a bench covering, dissection tray, instruments designated for necropsy, which includes scissors, forceps, sterile scalpel blade, bone cutters, blunt probe, small spatula and non-absorbable suture material. Organ and tissue harvest for histological examination require that the tissues be preserved in a fixative solution. Unless otherwise specified, the fixative most commonly used is 10% neutral buffered formalin. Note that the tissue samples should be 0.5-1 cm in thickness to allow sufficient penetration of the fixative solution. Fixation prevents decay, autolysis, and putrefaction; stops any ongoing biochemical reactions; and may increase the mechanical strength and stability of the treated tissues.

The method of euthanasia of the animal can also impact the quality of the samples. The most commonly used euthanasia method for mice and rats is an overdose of carbon dioxide gas. The animals are left in their home cage, which is placed, into a chamber, and CO2 is gradually introduced into the chamber at a displacement rate of 10-30% of the chamber volume/min. This causes the animals to lose consciousness prior to the perception of pain that is associated with nociceptor activation by carbonic acid. The flow is then maintained in the chamber till respiratory arrest has occurred and the animal is dead.

Following euthanasia, first perform an initial external examination by visually inspecting the carcass for lesions and masses, excessive tooth growth, or any staining of the fur at the mouth, nares, ears, eyes and the anal and genital openings. If warranted, perform a tape test, skin scraping, and pelt exams to detect external parasites. Once the external exam has been completed, it is time to start the necropsy, beginning with the abdominal cavity. Note that before removing any tissue samples it is important to observe the organ in situ.

To begin excising the skin, place a small cut just anterior to the pelvis in females and above the prepuce in males. Then, using the blunt dissection technique, loosen the skin from the fascia and muscle. Blunt dissection is a technique in anatomical dissection in which tissues are separated and underlying structures exposed without cutting. In this technique, the scissors are used to spread tissues apart rather than to cut them apart. The closed tips are pushed into tissue and then opened to split tissue along natural planes. This process requires patience and a delicate touch, as the stretching of the tissue can result in damage to adjacent organs and blood vessels. Then extend the cut to the chin. Next make, transverse cuts anterior to the hind limbs and posterior to the forelimbs, and use blunt dissection to expose the cervical area and chest. Extra care should be exercised to avoid rupturing the jugular and carotid vessels in the neck.

In females, with the skin excised, observe the mammary tissue from the top of the sternum at the manubrium to the genital opening on the ventral surface; extending laterally on both sides. Lactating or pregnant females will have increased mammary tissue volume and milk may be present. To excise the mammary glands, grasp the tissue edge with forceps and use blunt dissection to loosen attachments to the skin. Once the gland has been separated, it can be placed in a fixative solution for subsequent histological analysis.

At this stage, you can observe submandibular salivary glands, which are paired and located at the mandible — extending along the neck to the manubrium sternum. Removal of these glands requires blunt dissection and extra care when working in the cervical region to prevent rupture of blood vessels. Once freed from the underlying muscles, lift up the glands and sever any residual attachments. The glands require at least one cut to allow penetration of the fixative.

In addition, you can see the trachea, which extends from the epiglottis to the bifurcation of the bronchi. It is a ridged, cartilaginous tube that is flexible. While normally clear, euthanasia with CO2 can cause fluid accumulation in the lungs and trachea that looks like a frothy clear fluid. Subcutaneous fat will also be present in this area. Evaluate it for quantity and deposition. An obese animal may have a large amount of fat with the skin feeling thickened.

Prior to opening the body cavity, observe the abdominal, intercostal, and exposed neck muscles, and limbs for any thickening, masses or discoloration. To open the body cavity, first make a small transverse cut at the most caudal point of the exposed abdominal muscle. Then lift the muscle away from the organs, and cut along the linea alba to the xiphoid. Next, dissect the muscles laterally from the midline to just above the hind limbs on both sides. Lastly, cut along the curve of the ribs on both sides. Once the body cavity has been opened, evaluate the quantity and accumulation of abdominal fat. A healthy animal will have abdominal fat pads and some fat along the dorsal surface in the cavity. Observe the color of this tissue and note any abnormalities.

Now we are ready to begin the harvest of abdominal organs. Begin by locating the spleen, which is dark red and located along the lower curvature of the stomach. It should be regular in shape and with a slightly matte surface. To remove the spleen, lift the organ and snip the attachments to the stomach.

The stomach is located at the distal end of the esophagus. It appears to be two-toned, differentiating the muscular and glandular portions. Feel it for presence of food. An empty stomach should be noted, as it can be indicative of illness. Do not cut the stomach, as the contents will contaminate the organs in the abdominal cavity.

The small intestines are connected distally and inferior to the stomach. There are three distinct sections of the small intestine. First is the duodenum – a shorter section from the posterior stomach sphincter to the start of the jejunum. The bile duct enters here and the pancreatic tissue is more firmly attached to this portion of the small intestine. The jejunum is the center portion. Peyer’s Patches, which are small oval areas composed of lymphoid tissue, can be observed on the surface of the jejunum and ileum. The ileum is the longest portion of the small intestine that terminates at the cecum – located at the junction of the small and large intestines. The cecum appears greenish in color and is very soft.

The large intestine continues from the cecum to the anus. It is readily identifiable as fecal pellets can be visualized within the lumen of this structure. The small and large intestines are anchored to the body by the mesentery, a membrane containing blood vessels, fat and lymph nodes. This should be examined for enlarged lymph nodes and any masses prior to removal of the intestinal tract. The pancreas is a diffuse organ located posterior to the stomach. It is a light tan to gray color and composed of multiple small lobes with irregular edges. To harvest pancreas, grasp the organ and gently tease it from the surrounding mesenteric tissue. This must be done prior to the removal of the intestinal tract.

To remove the entire tract as one piece beginning with the stomach and extending to the anus, first place a ligature at the rectum and then make a cut through the large intestine just anterior to the anus. Next, place a ligature at the junction of the esophagus and stomach, following which the entire intestinal tract can be lifted and any membranous attachments severed. The whole thing can then be separated from the mesentery, cut into sections and fixed.

The kidneys are paired organs located against the muscles of the back. They should be the size and color of a dark kidney bean and have a smooth surface. Immediately anterior to the kidney is the adrenal gland appearing as a small light pink nodule.

To remove a kidney, isolate it using a forceps and cut between the organ and the ureter. The tough outer layer can then be peeled off to examine the surface. Cut one kidney in half along the long axis and the other transversely. Any grit within may indicate the presence of crystals or mineral deposits. Lastly, remove the liver, which is a dark red in color and its margins should be smooth with a crisp edge. Care should be taken when handling the liver, as it is a friable tissue. Any disruption to the integrity of the organ will result in blood leaking into the body cavity and obscure other organs.

To remove the liver, first gently reflect the lobes away from the diaphragm and make a cut through the blood vessels anterior to the structure. Next, reflect the liver back toward the diaphragm and grasp the fibrous node that connects all the lobes centrally. Lastly, lift the organ while severing all attachments to the intestinal tract and stomach.

The female reproductive system consists on the uterus and the ovaries. The uterus is a short Y-shaped structure with horns extending in both directions. The horns terminate at the fallopian tubes and the ovaries — located just below the kidneys. The ovaries will have a rough surface due to different maturation stages of the follicles.

To remove the ovaries, cut the arterial attachments anteriorly and the fallopian tube posteriorly. To remove the uterus, gently grasp and cut below the cervix. After the cut, lift the body and horns of the uterus breaking any attachments in the body cavity.

In males, you can also observe the preputial glands located just anterior to the prepuce. They appear large and are a gray to yellowish color with a foamy appearance. Removal and fixing of these glands is similar to submandibular glands. In addition, the male reproductive system consists of seminal vesicles, the prostate gland and testes. The seminal vesicles are white, “ram’s horn shaped” structures located anterior to the urinary bladder and attached on the midline at the prostate gland.

The prostate gland — generally light tan in color — is located surrounding the urinary bladder at the base. To visualize the testes, grasp the abdominal fat pads located in the lower abdomen and pull them anteriorly. This will pull the testes from the scrotum to allow examination. The surface should be smooth with fine vascularization evident on the surface.

The epididymis is along the lower margin of the testis and tapers toward the top. The vas deferens is attached to the end of the epididymis and leads back to the prostate. To remove the testes, cut the attachment at the scrotum and cut the vas deferens. To remove the prostate and seminal vesicles, grasp the base of the urinary bladder and lift while severing the attachments beneath the prostate.

Moving on to the organs within the thoracic cavity. To expose the vital structures, remove the diaphragm from the attachment to the ribs. Next, cut through the rib cage laterally on both sides up to the top of the manubrium sternum, and then reflect the bones cranially to visualize the thoracic organs.

The lungs are normally a bright pink color, spongy in texture with a smooth surface. However euthanasia with CO2 can cause pulmonary hemorrhages resulting in dark red splotches that can cover the entire lung surfaces.

The heart is dark red and the ventricles are muscular, which feel firm to the touch. The atria are darker red in color and sit at the top of the ventricles. They are much less muscular and appear flaccid. A thin translucent membrane called the pericardial sac surrounds the heart.

The thymus is located anterior to the heart and sits over the trachea. It should be smooth in texture. You can see the trachea as described before, and the esophagus is a very thin tube that lies directly behind the trachea and behind the heart and passes through the diaphragm to the stomach.

To remove the organs in the thoracic cavity, begin by grasping the trachea just above the thymus and make a perpendicular cut just anterior to the forceps. While maintaining the grasp, lift the trachea up caudally and snip any attachments of the lungs to the spinal surface in the rib cage. The esophagus may need to be cut to be able to lift the heart and lungs free of the chest cavity

After the heart is removed for the body, flush it with saline to remove residual blood and clots, or fill it with the fixative through the aorta. Once the lungs are excised, placed a loose ligature around the trachea. Next, thread a needle attached to a syringe containing the fixative into the lumen of the trachea, and tighten the ligature. Then inject the fixative until the lungs are inflated. Lastly, remove the needle and tighten the ligature further to prevent leakage.

With this breath of knowledge regarding the rodent necropsy and tissue harvest, let’s look at some of the current lab experiments involving these procedures.

Diagnostic necropsy is a common endpoint in cancer metastasis experiments. In this example, the investigators injected cancer cells into the rodent’s spleen Then, thirty to sixty days later, they conducted necropsy, which revealed significant liver metastases.

Tissue extraction is often followed by histological analysis, which helps in the study of microscopic anatomy of the sample. By following the protocol of fixation, embedding, sectioning and staining of tissues, researchers are able to study the microscopic structures in these organs, and uncover the effect of genetic or pharmacological interventions at atomic level.

At times researchers remove tissues to study physiological processes, like angiogenesis. Here, the experimenters exteriorized a rat’s mesenteric tissue to stimulate vascular growth. Then, they harvested a few sections, and treated them with the markers that stain the cells of any blood vessel, to study the cellular dynamics involved in vascular network growth.

You’ve just watched JoVE’s video detailing the steps of diagnostic necropsy and tissue harvest in lab animals. It is important to use proper techniques for organ removal and preservation, so that the extraction procedure has no effect on the interpretation of the data collected. As always, thanks for watching!

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